薄層色譜的使用方法 薄層色譜使用方法
時間:2023-01-10 09:30:02 作者:河北航信儀器 點擊:
【*** 使用手冊】薄層色譜是一種較新的色譜法,兼具柱色譜和紙色譜的優(yōu)點,能快速分離和定性分析少量物質(zhì)。薄層色譜性能優(yōu)異,操作也較簡單?! ?.選擇吸附劑 吸附劑一般要求直徑為10~40μm,需要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)選擇,常用的吸附劑有以下幾種。 硅膠:微酸性極性固定相,適用于酸性、中性物質(zhì)分離 氧化鋁:堿性極性固定相,適用于堿性、中性物質(zhì)分離 纖維素:含有羥基的極性固定相,適用于分類親水性物質(zhì)。 聚酰胺:含有酰胺基極性固定相,適用于酚類、醇類化合物的分離。 2.制備薄層板 薄層板的質(zhì)量將決定分離的效果,應該盡量均勻且厚薄一致。薄層板的制備主要有兩種方法: ?、賹崈舾稍锏牟AО逯糜阡伆迤髦虚g,在鋪板槽中倒入糊狀物,自左向右推,將糊狀物均勻地涂在玻璃板上?! 、趯⒄{(diào)成糊狀物倒在玻璃板上,或用角匙舀到玻璃板上,再用玻璃棒或角匙鋪平并用手捏住玻璃板一角,輕輕碰敲桌面,使薄層表面均勻并除去 糊狀物中的氣泡?! ≈苽渫瓿珊筮€需要將涂好的薄層板水平放置于室溫下晾干,然后放在烘箱內(nèi)加熱活化。(硅膠板需在烘箱內(nèi)慢慢升溫至105-110度后保溫30分鐘;氧化鋁板需在200-220度烘4小時) 3.點樣 將待測樣品溶在極性盡可能低的溶劑中配成1%的溶液。用一支平口的細毛細管蘸取少量樣品溶液點在薄板上。 4.展開 薄層層析有多種展開方式,可分為上行、下行、雙向展開等,這里介紹一下上行法和下行法?! ∩闲蟹ǎ涸诟字屑尤胱銐蛄康恼归_劑,將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,密封缸蓋,待展 開前沿離薄板上端1cm時,取出薄層板,并用鉛筆輕輕畫下溶劑前沿,晾干?! ∠滦蟹ǎ涸谡归_缸的蓋子上裝一個小 鉤,將展開的紙片鉤住,并通過一濾紙條將展 開劑和紙片連起來。待展開劑前沿離紙片下端 1cm時,取出紙片,并用鉛筆輕輕畫下溶劑前 沿,晾干?! ?.顯色 晾干薄板溶劑后對板上的組分進行定位。將顯色劑以噴霧方式直接噴到薄層板上可顯示不同顏色的斑點。此外對于無色樣品,可采用帶熒光劑的吸附劑做薄板,展開后在紫外光下顯暗色斑點;對于在光學條件下不顯色的物質(zhì),可將薄板置于含有少量碘晶體的密閉容器中,與碘作用呈棕色斑點?! ?.Rf值計算 用尺測量原點到色斑**的距離除以原點到溶劑前沿的距離。不同的物質(zhì)往往有著不同的Rf值,根據(jù)這個就可以簡單判斷它們是否是同一物質(zhì),但Rf值相同之后,還要進行進一步判斷才能確定他們是否為同一個物質(zhì)。
薄層色譜儀的應用如何?
薄層色譜法,是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。
待點樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。
薄層掃描儀是可以對斑點進行掃描的專用分光光度計,用可見光或紫外光作光源,線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點;
該斑點就吸收該組分特征波長的單色光,剩余的單色光經(jīng)透射或反射或發(fā)射熒光,由檢測器積分起來,獲得這塊斑點面積的待測物質(zhì)含量。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。
一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點成一條線,則可分離多達500mg的樣品。
因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。
此外,在進行化學反應時,常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑;
帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上;
涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。
待展開劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。