薄層色譜的使用方法產(chǎn)品說明 薄層色譜使用方法
時(shí)間:2023-01-09 09:30:01 作者:河北航信儀器 點(diǎn)擊:
【*** 使用手冊(cè)】薄層色譜掃描儀是可以對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行掃描的分光光度計(jì),通常用可見光或紫外光作光源,線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點(diǎn),該斑點(diǎn)就吸收該組分特征波長的單色光,剩余的單色光經(jīng)透射或反射或發(fā)射熒光,由檢測器積分起來獲得這塊斑點(diǎn)面積的待測物質(zhì)含量。儀器適用于化工、醫(yī)藥、臨床、農(nóng)業(yè)、食品、毒理等領(lǐng)域的各種化合物的分離、精制、定性鑒別、雜質(zhì)檢查和含量測定。 操作方法: 1、薄層板制備:除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的氣泡后倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2~0.3mm)取下涂好薄層的玻板,置水平臺(tái)上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置有干燥劑的干燥箱中備用。 2、點(diǎn)樣:除另有規(guī)定外,用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底邊2.0cm,樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況應(yīng)以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面?! ?、展開展開缸如需預(yù)先用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封缸頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或按正文規(guī)定操作。將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5-1.0cm密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離取出薄層板,晾干后按各品種項(xiàng)下的規(guī)定檢測?! ?、如需用薄層掃描儀對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描檢出,或直接在薄層上對(duì)色譜斑點(diǎn)作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除規(guī)定外可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說明, 結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在**濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與對(duì)照品在同一塊薄層上展開后掃描,進(jìn)行比較并計(jì)算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。
薄層色譜儀的適用
薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù),屬固—液吸附色譜;
它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn),一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚加大;
因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。
此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。
薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上;
涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時(shí);
將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。
薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。
是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。
一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;
另一方面若在制作薄層板時(shí),把吸附層加厚,將樣品點(diǎn)成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。
因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。
此外,在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時(shí),常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。