【***** 維修保養(yǎng)】液相色譜，是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。　　　　使用注意事項(xiàng)　　　　1.流動(dòng)相必須用HPLC級(jí)的試劑，使用前過(guò)濾除去其中的顆粒性雜質(zhì)和其他物質(zhì)(使用0.45um或更細(xì)的膜過(guò)濾)?！　　　?.流動(dòng)相過(guò)濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應(yīng)該恢復(fù)到室溫后使用。　　　　3.不能用純乙腈作為流動(dòng)相，這樣會(huì)使單向閥粘住而導(dǎo)致泵不進(jìn)液?！　　　?.使用緩沖溶液時(shí)，做完樣品后應(yīng)立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時(shí)，然后用甲醇(或甲醇水溶液)沖洗40分鐘以上，以充分洗去離子。對(duì)于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20ml以上?！　　　?.長(zhǎng)時(shí)間不用儀器，應(yīng)該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇等)，因?yàn)榧兯组L(zhǎng)霉?！　　　?.每次做完樣品后應(yīng)該用溶解樣品的溶劑清洗進(jìn)樣器。　　　　7.C18柱不能進(jìn)蛋白樣品，血樣、生物樣品?！　　　?.堵塞導(dǎo)致壓力太大，按預(yù)柱→混合器中的過(guò)濾器→管路過(guò)濾器→單向閥檢查并清洗。清洗方法；①以異丙醇作溶劑沖洗：②放在異丙醇中間用超聲波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。　　　　9.氣泡會(huì)致使壓力不穩(wěn)，重現(xiàn)性差，所以在使用過(guò)程中要盡量避免產(chǎn)生氣泡?！　　　?0.如果進(jìn)液管內(nèi)不進(jìn)液體時(shí)，要使用注射器吸液：通常在輸液前要進(jìn)行流動(dòng)相的清洗?！　　　?1.要注意柱子的pH值范圍，不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品?！　　　?2.更換流動(dòng)相時(shí)應(yīng)該先將吸濾頭部分放入燒杯中邊振動(dòng)邊靖洗，然后插入新的流動(dòng)相中。更換無(wú)互溶性的流動(dòng)相時(shí)要用異丙醇過(guò)渡一下?！　　　∫合嗌V儀的維護(hù)　　　　1．HPLC的日常操作條件：溫度：10—30℃；相對(duì)濕度《80％；是恒溫、恒濕，遠(yuǎn)離高電干擾、高振動(dòng)設(shè)備?！　　　?．泵的保養(yǎng)：　　　　1)使用流動(dòng)相盡量要清潔；　　　　2)進(jìn)液處的沙芯過(guò)濾頭要經(jīng)常清洗；　　　　3)流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀；　　　　4)避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡;　　　　3．進(jìn)樣器的保養(yǎng)：　　　　1)每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染；　　　　4．柱的保養(yǎng)：　　　　1)柱子在**情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng)；　　　　2)當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí)，閥件或管路**要清洗干凈；　　　　3)要注意流動(dòng)相的脫氣；　　　　4)避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；　　　　5)進(jìn)樣樣品要提純；　　　　6)嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；　　　　7)每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；　　　　8)每天分析測(cè)定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣?lái)清洗柱；　　　　9)若分析柱長(zhǎng)期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉；　　　　5．檢測(cè)器(UV)的保養(yǎng)：　　　　1)紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、柱平衡得差不多時(shí)，打開(kāi)檢測(cè)器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測(cè)器?！　　　?)樣品池要保養(yǎng)。 有關(guān)液相色譜儀的系統(tǒng)組成介紹

液相色譜儀系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。

儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相；

被流動(dòng)相載入色譜柱（固定相）內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)；

在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別；

被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀；

數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)**液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；

下面將分別敘述其各自的組成與特點(diǎn)。

進(jìn)樣系統(tǒng)

一般采用隔膜注射進(jìn)樣器或高壓進(jìn)樣間完成進(jìn)樣操作，進(jìn)樣量是恒定的。

這對(duì)提高分析樣品的重復(fù)性是有益的。

輸液系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括高壓泵、流動(dòng)相貯存器和梯度儀三部分。

高壓泵的一般壓強(qiáng)為47～44X10Pa，流速可調(diào)且穩(wěn)定，當(dāng)高壓流動(dòng)相通過(guò)層析柱時(shí)；

可降低樣品在柱中的擴(kuò)散效應(yīng)，可加快其在柱中的移動(dòng)速度；

這對(duì)提高分辨率、回收樣品、保持樣品的生物活性等都是有利的。

流動(dòng)相貯存器和梯度儀，可使流動(dòng)相隨固定相和樣品的性質(zhì)而改變；

包括改變洗脫液的極性、離子強(qiáng)度、PH值，或改用競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑或變性劑等。

這就可使各種物質(zhì)（即使**一個(gè)基團(tuán)的差別或是同分異構(gòu)體）都能獲得有效分離。

分離系統(tǒng)

該系統(tǒng)包括色譜柱、連接管和恒溫器等。

色譜柱一般長(zhǎng)度為10～50cm（需要兩根連用時(shí)，可在二者之間加一連接管）；

內(nèi)徑為2～5mm，由"優(yōu)質(zhì)不銹鋼或厚壁玻璃管或鈦合金等材料制成；

住內(nèi)裝有直徑為5～10μm粒度的固定相（由基質(zhì)和固定液構(gòu)成）。

固定相中的基質(zhì)是由機(jī)械強(qiáng)度高的樹(shù)脂或硅膠構(gòu)成；

它們都有惰性（如硅膠表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔徑可達(dá)1000?）和比表面積大的特點(diǎn)；

加之其表面經(jīng)過(guò)機(jī)械涂漬（與氣相色譜中固定相的制備一樣）；

或者用化學(xué)法偶聯(lián)各種基因（如磷酸基、季胺基、羥甲基、苯基、氨基或各種長(zhǎng)度碳鏈的烷基等）或配體的有機(jī)化合物。

因此，這類固定相對(duì)結(jié)構(gòu)不同的物質(zhì)有良好的選擇性。

例如，在多孔性硅膠表面偶聯(lián)豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纖維細(xì)胞中的一種糖蛋白分離出來(lái)。

另外，固定相基質(zhì)粒小，柱床極易達(dá)到均勻、致密狀態(tài)，極易降低渦流擴(kuò)散效應(yīng)。

基質(zhì)粒度小，微孔淺，樣品在微孔區(qū)內(nèi)傳質(zhì)短。這些對(duì)縮小譜帶寬度、提高分辨率是有益的。

根據(jù)柱效理論分析，基質(zhì)粒度小，塔板理論數(shù)N就越大。

這也進(jìn)一步證明基質(zhì)粒度小，會(huì)提高分辨率的道理。

再者，**液相色譜的恒溫器可使溫度從室溫調(diào)到60C；

通過(guò)改善傳質(zhì)速度，縮短分析時(shí)間，就可增加層析柱的效率。