[目的]　　規(guī)范Waters液相色譜系統(tǒng)的使用和維護?！　范圍]　　本規(guī)程適用于Waters液相色譜系統(tǒng)的使用和維護?！　職責]　　質檢室儀器分析員負責Waters液相色譜系統(tǒng)的日常使用和維護?！　系統(tǒng)組成]　　本系統(tǒng)由Waters 600E多溶劑輸送系統(tǒng)(有梯度控制器的高壓輸液泵)、Waters在線脫氣機、Rheodyne 7725i手動進樣閥、Waters 2487雙通道紫外檢測器、Millennium32色譜工作站/電腦等組成，另外還包括打印機、斷電保護器和通風柜等輔助設備?！　開機程序]　　1. 狀態(tài)檢查：　　1)檢查儀器外觀是否完好　　2)檢查各種線纜連接是否穩(wěn)固，外表有無損傷痕跡　　3)確認環(huán)境溫度在15至35℃之間　　4)相對濕度在20%至80%之間　　3. 接線要求：　　1)液相色譜主機電源　　2)連接電腦主機和顯示器電源　　4. 開機步驟：　　1)打開電腦電源，進入windows系統(tǒng)　　2)打開液相色譜電源，儀器開始自檢(約5～6min)，待儀器操作面板上出現(xiàn)“Idle”字樣表示自檢成功，儀器進入待命狀態(tài)?！　測試步驟]　　1. 進入軟件　　1)雙擊電腦桌面上的Empower快捷圖標，出現(xiàn)Empower登陸窗口。輸入用戶名與密碼，默認賬號為“system”，密碼為“manager”，點擊“OK”進入Empower工作站。　　2)選擇“運行樣品”界面，點擊“確定”,然后選擇待選定的操作項目以及色譜系統(tǒng)　　2 編輯儀器方法和方法組　　1)在“運行樣品”界面中，監(jiān)視區(qū)單擊方法組編輯向導?！　?)選擇新建按鈕，彈出儀器方法編輯器?！　?)通用編輯頁面中，可設置單次輸送體積，查看脫氣選項，確認設置正確，選擇等度或者梯度，總流量以及流動相配比等選項?！　?)單擊2475圖標，彈出2475編輯界面，在波長模式中選擇相應的波長模式，單波長或者雙波長，輸入所需的波長，選擇相應的采樣速率，一般為2點/秒?！　?)點擊“文件”，選擇“另存為”，輸入儀器方法名稱，點擊“保存”，退出。　　6)在被選項中選擇所需的儀器方法名稱，點擊“下一步”?！　?)在下拉菜單中選擇所需的處理方法和報告方法(如果沒有合適的方法選擇"無處理"、"無報告")，點擊“下一步”。　　8)輸入方法組名稱，單擊"完成"?！　? 運行方法進樣　　1)在“運行樣品”界面中，選擇相應的儀器方法，點擊“監(jiān)視器”，在監(jiān)視窗口監(jiān)視基線至系統(tǒng)平衡，停止系統(tǒng)監(jiān)視狀態(tài)，點擊停止按鈕。單進樣，點擊參數(shù)編輯快捷方式進入定義單進樣參數(shù)編輯界面，輸入樣品名、功能、方法組等參數(shù)。點擊“進樣”?！　?)建立樣品組和樣品組方法　　選擇“樣品組”任務欄，進入樣品列表，依次設置以下內容：樣品瓶號、樣品名稱、樣品類型、進樣次數(shù)、進樣體積、運行時間、方法組、、下一進樣延遲時間等，點擊“運行”，方法組開始進樣。　　[更換溶劑]　　1.打開600E泵后，轉動進口集合管閥手柄(以下簡稱手柄)至RUN位置；　　2 .將一塑料燒杯放在參照閥出口管下以收集分流的溶劑，向右打開參照閥(斷開柱和進樣器)；　　3. 按[Direct]鍵使其顯示直接控制屏幕，設流速為1ml/min(梯度配比閥在0ml/min時不工作)；　　4. 選擇欲使用的某一溶劑通道，設其比例為**，其它為0%；　　5. 將輸液管從原有溶劑瓶中取出，放入一干凈的空瓶中；　　6. 逆時鐘轉動手柄至DRAW位置，用啟動注射器從進口集合管閥的接口抽出約2ml溶劑；　　7. 再將輸液管放入新溶劑瓶內，繼續(xù)抽吸直到新溶劑出來并無氣泡為止；　　8. 轉動手柄至RUN位置，將啟動注射器取下并排掉筒內的溶劑?！　?. 重復5.2.2.4.~5.2.2.8.直至所有即將使用的溶劑更換完畢?！　排氣泡]　　1. 打開參照閥，換流動相為**超純水，設流速為10ml/min(注意：確認參照閥是打開的，否則可能損壞安裝好的柱)；　　2. 轉動進口集合管閥手柄至DRAW位置，用啟動注射器抽出約10ml水；　　3. 順時鐘轉動手柄至INJ位置，緩慢用力使水通過泵頭從參照閥出口管排出(注意不要將氣泡注入泵中)；　　4. 按[Stop flow]屏幕鍵停泵，關上參照閥?！　?. 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下泵出口管，用塑料管連接至塑料燒杯中，設流速為10ml/min，沖洗2~5min(或更長時間)后停泵，重新接上柱?！　平衡系統(tǒng)（分兩種情況進行）]　　1. 等度模式　　1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超純水沖洗系統(tǒng)10min?！　?.2. 檢查管路連接、柱接口及泵頭處是否漏液，如漏液應予以排除?！　?.3. 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應在平均值的5~10%以內。如超出此范圍，可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，重復5.2.3.下的步驟?！　?.4. 壓力波動平穩(wěn)后，換檢驗方法規(guī)定的流動相比例沖洗系統(tǒng)。在檢查基線穩(wěn)定性前，讓zui少5~6倍柱體積的流動相通過系統(tǒng)。　　1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method檔內選擇所需的儀器方法，按「Monitor」(此后泵由軟件控制)，觀察基線和壓力變化。如果沖洗至基線漂 移<10-3Au/min，噪聲為10-4Au數(shù)量級，且壓力平穩(wěn)時，可認為系統(tǒng)已達到平衡狀態(tài)，可以進樣。5.3.1.6. 按「Abort」圖標(左上第五個)，停止監(jiān)視基線?！　?. 梯度模式　　2.1. 按檢驗方法規(guī)定的條件沖洗平衡系統(tǒng)，并注意壓力波動變化和排氣泡。　　2.2. 在進樣前運行1~2次空白梯度?！　進樣]　　1. 在QuickSet窗口內左下部選〈Single〉標簽，在Sample Name檔內填寫試樣名稱；在Function檔內選擇試樣類型(標準選“Inject Standards”；樣品選“Inject Samples”)；在Method Set檔內選擇所需的方法組；在Injection Volume檔內輸入進樣體積；在Run Time檔內輸入記錄時間。　　2. 用針頭濾器過濾試樣溶液(注射液可不必過濾)，用試樣溶液清洗注射器，并排除氣泡后抽取適量。如按部分裝液法，用微量注射器定容進樣時，進樣量應不大于定量環(huán)體積的50%，并要求每次進樣體積準確、相同；5.4.2.2. 如按**裝液法，用定量環(huán)定容進樣時，進樣量應不小于定量環(huán)體積的3倍(5~10倍準確性更佳)?！　?. 按〈Single〉標簽內右邊的進樣(Inject)按鈕，等待窗口底部狀態(tài)檔內顯示“Waiting”后，方可進樣。　　4. 將進樣閥手柄轉動至Load位置，將注射器針**插入進樣閥入口中，平穩(wěn)地注入試樣溶液，除另有規(guī)定外，讓注射器留在進樣閥上，將進樣閥手柄快速轉動至Inject位置，系統(tǒng)將自動運行，采集數(shù)據(jù)并記錄圖譜。　　5. 讓進樣閥手柄保持在Inject位置，到下次進樣前1~2min切換回Load位置，將注射器從進樣閥中拔出?！　?. 先用水再用試樣溶液清洗注射器后，按以上程序繼續(xù)進樣，直至完成?！　數(shù)據(jù)處理（外標法）和打印]　　1. 右擊系統(tǒng)主界面下的『Browse Project』圖標，選擇相應的項目，按「OK」進入Project窗口，選〈Channels〉標簽。　　2. 建立處理方法　選擇一個待積分的標準，右擊后選“Review”進入Review窗口。按「Processing Method Wizard」圖標(左邊*個)進入New Processing Method向導窗口，按「OK」?！　?.1. 劃入一個感興趣的zui窄的峰，按「Next>」；　　2.2. 劃入一段包含噪聲的基線，按「Next>」；　　2.3. 劃入一段要積分的區(qū)間，按「Next>」；　　2.4. 根據(jù)情況選擇zui小峰面積和zui小峰高，按「Next>」、「Next>」；　　2.5. 在Name檔內輸入各組分峰的名稱，按「Next>」、「Next>」；　　2.6. 在Method Name檔內填寫方法名稱，按「Finish」。退出Review窗口?！　?. 修改標準　選中所有標準，右擊后選“Alter Sample”進入Alter Sample窗口?！　?.1. 在Sample Type檔內將Unknown改成Standard；　　3.2. 按「Amount」圖標(左上第六個)進入Component Editor窗口；　　3.3. 按「Copy from Process Method」圖標(左上第五個)，選擇剛建立的處理方法，按「Open」，在Value和Units檔內分別輸入標準所含各組分的數(shù)值和單位，完成后按「OK」回到Alter Sample窗口；　　3.4. 按「Save」圖標存盤，退出Alter Sample窗口?！　?. 積分　先選中所有標準，再選中所有未知樣品，右擊后選“Process”進入Background Processing & Reporting窗口，選Use specified processing methods，在右邊檔內選擇剛建立的處理方法，按「OK」?！　?. 打印　在Project窗口下選〈Results〉標簽。　　5.1. 選中要打印的標準/樣品，右擊后選“Preview”進入Open Report Method窗口，選合適的打印方法，按「OK」進入Report Publisher (Preview)窗口，預覽打印的結果。按打印(Print)圖標(左上第二個)即可打印結果?！　?.2. 按「Close」可進入Report Publisher窗口對報告方法進行修改，完成后按「Print」圖標(右數(shù)第二個)即可打印結果?！　?. 數(shù)據(jù)處理完成后，關閉所有窗口，在主界面下按「Logout」退出系統(tǒng)，關閉Millennium32軟件，再依次關閉電腦主機、顯示器、打印機。　　7. 清洗系統(tǒng)和關機　　7.1. 數(shù)據(jù)采集完畢后，關閉檢測器，繼續(xù)以工作流動相沖洗10min后，換水沖洗?！　關機程序]　　1)關機前應用適當比例的有機相和水相沖洗柱子　　2)關閉儀器電源　　3)關閉電腦電源　　[維護保養(yǎng)程序]　　1)定期清潔，保障環(huán)境和儀器室內衛(wèi)生條件，防塵?！　?)使用完畢后用防塵布遮蓋儀器如連續(xù)3個月未使用儀器，將儀器通電1個小時后再關閉，除掉儀器內部濕氣?！　。圩⒁馐马棧荨　?.使用儀器前必須仔細閱讀儀器使用說明書。　　2.按儀器使用要求準備測試樣品，不得測試不符合要求的樣品?！　?.小心操作，防止樣品污染和腐蝕儀器。　　4.有機溶劑有害健康，各溶劑瓶口應封嚴?！　?.儀器使用后按操作程序，切斷電源，清理擦拭儀器，蓋上儀器罩?！　?.在操作時發(fā)生故障應停止使用，并及時通知管理人員。 液相色譜柱柱壓升高的原因

　　造成柱壓升高的原因很多。一般是由于柱床內產生了異常的占位性物體，造成流體阻力加大所引起的。

　　1、流動相過濾不良

　　因機械性雜質堵塞進口濾片，導致壓力升高。這往往是由于流動相沒有過濾，或雖已過濾但濾膜孔徑過大或濾片損壞，使固體雜質滯留于濾板上所造成的。濕度傳感器探頭,不銹鋼電熱管PT100傳感器,鑄鋁加熱器,加熱圈流體電磁閥

　　2、霉菌生長

　　霉菌在流動相中、管路中或柱子進口處繁殖、生長堵塞濾板，導致壓力升高。這種現(xiàn)象在夏季，尤其是使用磷酸鹽緩沖液為流動相時更易發(fā)生。在夏季使用磷酸鹽緩沖液時一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。即使保存在冰箱中，一般也不要超過兩天。否則，即使不堵塞濾板，也會因**或霉菌孳生產生代謝物而造成對樣品分析的干擾。

　　3、非特異性吸附

　　當溶質在柱子上有較強的非特異性吸附，且當前所用的流動相難以將它們洗脫時，累積的未洗脫溶質也會造成阻力增大和壓力升高。

　　4、更換流動相時置換不**

　　當改換流動相體系時，不**的更換使不同性質、互不混溶的流動相存在于一個體系之中，也會造成壓力升高。

　　5、鹽晶體的析出

　　使用緩沖液或添加有緩沖液的流動相后，緩沖液中的無機鹽成份可能會殘留在體系之中。它們會因在新流動相體系中的溶解度降低而析出，造成流體阻力加大、壓力升高。

　　6、樣品的沉淀

　　當樣品所使用的溶劑與流動相不一致時，樣品進入柱中有時可能因溶解度降低而沉淀出來，造成壓力升高。

　　7、壓力脈沖

　　運行過程中，有時會產生系統(tǒng)內壓力的突然升降。例如，轉動進樣閥時動作過緩，造成液流堵塞后再瞬間釋放;開機瞬間壓差較高等。如此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的崩壞和柱床結構的微小變化。填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大。