流動相脫氣是液相色譜儀提高檢測性能和保護(hù)色譜柱的有效措施。

一、液相色譜儀液相色譜儀流動相脫氣的目的：

1、使色譜泵輸液均勻準(zhǔn)確，減小脈動。

2、提高保留時間和色譜峰面積的重現(xiàn)性。

3、防止氣泡引起尖峰。

4、使基線穩(wěn)定，提高信噪比。

5、降低溶劑的紫外吸收本底。

6、減少死體積。

7、防止填料氧化。

二、液相色譜儀流動相常用的脫氣方法：

1、吹氦脫氣法：

利用液體中氦氣的溶解度比空氣低的特性，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，適合所有溶劑。但成本高，使用較少。

2、加熱回留法：

脫氣效果比較好，但操作復(fù)雜。

3、超聲波脫氣法：

操作簡單，但脫氣效果不理想。

4、抽真空脫氣法：

利用真空泵降壓至0.05～0.07MPa，可除去溶劑中的氣體。但抽真空會引起混合溶劑組分的變化，從而影響實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，多用于單一溶劑體系。

5、在線真空脫氣法：

利用膜滲透技術(shù)，在線真空脫氣，智能控制，成本低，脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。

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　　1、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？　　①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子?！　、诖嬖诟蓴_峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子　?、劭赡苤d，減少進(jìn)樣量?！　?、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？　?、贅悠妨坎蛔悖鉀Q辦法為增加樣品量　?、跇悠肺磸闹又辛鞒??？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子　　③樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器　?、軝z測器衰減太多。調(diào)整衰減即可?！　、輽z測器時間常數(shù)太大。解決辦法為降低時間參數(shù)　　⑥檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗?！　、邫z測池中有氣泡。解決辦法為排氣?！　、嘤涗泝x測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。　?、崃鲃酉嗔髁坎缓线m。調(diào)整流速即可?！　、鈾z測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線?！　?、做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？　　①泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是**泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；　?、诒壤y失效，更換比例閥即可；　　③泵密封墊損壞，更換密封墊即可；　?、苋軇┲械臍馀?，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；　?、菹到y(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；　?、尢荻认疵?，這時壓力波動是正常的?！　?、我購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時柱壓過高，請問為什么？　　柱壓過高是HPLC柱用戶***常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因?！　、俨鹑ケＷo(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；　?、诎焉V柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；　　③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過的柱子?！　、芨鼡Q柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題?！　?、色譜柱中的流動相會排干嗎？　　不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時補(bǔ)充流動相，泵將溶劑瓶中的流動相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動相吸干，并不會造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣?！　∠啾戎?，另一個更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時間。即使色譜柱真的變干了，也不**就不可救藥了?？梢試L試用一種**脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個小時或更多的時間被**浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)。　　6、為何出現(xiàn)峰展寬？　?、贅悠敷w積過大--用流動相配樣,總的樣品體積小于**峰的15%　?、谠谶M(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展--進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散　?、蹟?shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢--設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)　?、軝z測器時間常數(shù)過大--設(shè)定時間常數(shù)為感興趣**峰半寬的10%　?、萘鲃酉嗾扯冗^高--增加柱溫,采用低粘度流動相　　⑥檢測池體積過大--用小體積池,卸下熱交換器　?、弑Ａ魰r間過長--等度洗脫時增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫　　⑧柱外體積過大--將連接管徑和連接管長度降至***小　?、針悠愤^載--進(jìn)小濃度小體積樣品　　7、除了在線脫氣，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？　　加熱回流脫氣，脫氣效果***佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣***，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中***常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。　　8、如何簡單判斷比例閥是否內(nèi)漏？　　設(shè)定泵使用一個單獨(dú)通路（A），打開Purge閥，流速5ml/min，提起其他溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭直至離開液面，觀察這些通路（B、C、D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動，正常時均不應(yīng)流動。