【導(dǎo)讀】一、流動(dòng)相溶劑的選擇1.所選用的流動(dòng)相溶劑要有**的化學(xué)穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應(yīng)，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。2.

一、流動(dòng)相溶劑的選擇

1.所選用的流動(dòng)相溶劑要有**的化學(xué)穩(wěn)定性，不與固定相和樣品組分起反應(yīng)，其純度和化學(xué)特性必須滿足色譜過程的穩(wěn)定性和重復(fù)性的要求。

2.溶劑應(yīng)當(dāng)不干擾檢測器的工作，溶劑應(yīng)與檢測器匹配，選擇不影響檢測器正常工作應(yīng)選擇在測定波長范圍內(nèi)無吸收的流動(dòng)相。

3.在制備分離中,溶劑應(yīng)當(dāng)易于除去,不干擾對分離組分的回收。

4.溶劑的粘度要小，保證合適的柱壓降。

5.從實(shí)用角度考慮，溶劑應(yīng)當(dāng)價(jià)格低廉，容易購得，使用**，純度要高。

二、流動(dòng)相溶劑使用的注意事項(xiàng)

1.流動(dòng)相溶劑應(yīng)選擇HPLC的溶劑或依此為標(biāo)準(zhǔn)的溶劑。流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣，**微粒和灰塵。在送液泵內(nèi)，為了防止雜物（固體）進(jìn)入流路，裝有吸濾器，但網(wǎng)孔徑為10μm，比此更小的顆粒仍然可通過，這會導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此，建議常用0.45μm濾膜過濾。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣，如不脫氣，在溶劑混合時(shí)，或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡，會導(dǎo)致泵誤動(dòng)作和輸液不暢，檢測器產(chǎn)生噪聲信號等。

2.流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí)，流動(dòng)相在恢復(fù)到室溫前，基線水平很難穩(wěn)定，特別是發(fā)生漂移，也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時(shí)，混合液變化大，往往會與室溫相差很大，務(wù)必注意。

3.做HPLC流動(dòng)相的試劑應(yīng)用HPLC級的、水應(yīng)用二次蒸餾水，水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換，防止長菌變質(zhì)。使用去離子水、針劑水、純凈水（炊用）并不合適、尤其是做梯度洗脫時(shí)，水中的不純物會成為鬼峰，從而干擾分析結(jié)果。

4.流動(dòng)相的pH值過高或過低，流動(dòng)相使用純水，使用高濃度磷酸鹽緩沖溶液，使用離子對試劑等，均可能造成色譜柱填料被化學(xué)破壞，這種對色譜柱固定相及鍵合相的破壞通常是不可修復(fù)的

5.用緩沖鹽做流動(dòng)相時(shí)，在使用前和使用后都要用水清洗流路，**禁止將緩沖溶液留在流路中靜置或更長時(shí)間。

6.若需要使用含鹽的流動(dòng)相，使用前請過濾。并且使用該含鹽流動(dòng)相前，色譜柱需先用低比例有機(jī)相（有機(jī)相含量應(yīng)不低于10%）的溶液沖洗，以免緩沖鹽析出。流動(dòng)相若為蒸餾水或含鹽的緩沖液，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，以免流動(dòng)相因滋生微生物而造成柱填料的污染。

7.進(jìn)行梯度實(shí)驗(yàn)時(shí)要注意梯度變化過程中流動(dòng)相的互溶性，避免因流動(dòng)相不互溶而導(dǎo)致的緩沖鹽析出問題。反相系統(tǒng)更換正相系統(tǒng)或正相系統(tǒng)更換反相系統(tǒng)時(shí)，用異丙醇置換系統(tǒng)內(nèi)的儲存流動(dòng)相后在接柱子。

8.在更換兩種互不相溶的流動(dòng)相時(shí)，中間要用異丙醇溶液清洗過渡。例如：先用甲醇水做流動(dòng)相，然后在用正己烷做流動(dòng)相時(shí)，**要先用異丙醇溶液沖洗甲醇水，然后用正己烷沖洗異丙醇，反之也是一樣。在更換流動(dòng)相時(shí)還要考慮色譜柱是否更換。

9.儀器在短期（兩三天）不用時(shí)，流路中可以是甲醇或水。儀器在長期不用時(shí)，流路中應(yīng)用甲醇。

10.對于UV等檢測器用于高靈敏度檢測時(shí)，要使用UV吸收性小的HPLC的溶劑作為流動(dòng)相溶劑，如甲醇、乙腈等。

11.當(dāng)流動(dòng)相溶劑為乙腈時(shí)，流速為1ml/min泵的正常壓力5～7Mpa之間，如果壓力逐漸降低，基線也出現(xiàn)異常。這是由于乙氰的粘性大，導(dǎo)致泵的流速降低?？蛇m當(dāng)提高流速使泵的壓力恢復(fù)正常即可。

12.流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、丙酮、四氯呋南、二甲化砜等溶劑，會對流路中的PEEK樹脂管路強(qiáng)度變成差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑，如KCI、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用，以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí)，分析完了后，應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

13.用于檢定梯度等性能時(shí)，短時(shí)間使用在0.5%以下的低濃度丙酮水溶液是沒有問題的。

14.注意：稀硝酸與甲醇不能混合，否則有可能會引起爆炸。

三、液相色譜流動(dòng)相的貯存

流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi)，不能貯存在塑料容器中。因許多有機(jī)溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑，導(dǎo)致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng)，可能造成柱效降低。貯存容器**要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化，也防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要貯存。如確需貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，用前應(yīng)重新濾過。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子無此現(xiàn)象。

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相關(guān)熱詞：

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　　液相色譜儀適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中針對這種精密而又運(yùn)用廣泛的科學(xué)儀器，昨天我們講解了其常見的柱壓問題及解決方法，今天我們來聊一聊基線。HPLC常見的基線問題主要有基線漂移以及基線噪音?！　』€漂移　　線漂移基線漂移是色譜工作者普遍遇到的問題。一般說來，機(jī)器剛起動(dòng)時(shí)，基線容易漂移，大概要30min的平衡時(shí)間，如果用了緩沖溶液、緩沖鹽，或者在低波長下(220nm)平衡時(shí)間相對會比較長，仍然發(fā)現(xiàn)基線漂移，原因可能有以下幾種：　　1、柱溫波動(dòng)　　控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，檢查是否有打開的窗戶或空調(diào)對著柱溫箱?！　?、流通池被污染或有氣體　　用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池(盡量斷開柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用鹽酸)。　　3、紫外燈能量不足　　更換新的紫外燈　　4、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成。 檢查流動(dòng)相的組成，使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑?！　』€噪音　　對于紫外檢測器, 氘燈光源打開后要預(yù)熱30 min以上, 基線才能穩(wěn)定。噪聲是指與被測物無關(guān)的檢測器輸出信號的隨機(jī)擾動(dòng)變化, 分短期噪聲和長期噪聲兩種。　　基線噪音(規(guī)則的)　　產(chǎn)生基線噪音的原因有：在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣;漏液;流動(dòng)相混合不**;溫度影響(柱溫過高,檢測器未加熱);在同一條線上有其他電子設(shè)備;泵振動(dòng)?！　×吮苊饣€噪音,在正式進(jìn)樣之前,需要對流動(dòng)相脫氣;沖洗系統(tǒng)以除去檢測器或泵中的空氣;檢查管路接頭是否松動(dòng);泵是否漏液;是否有鹽析出和不正常的噪音,如有必要,更換泵密封;用手搖動(dòng)使溶劑混合均勻或使用低粘度的溶劑減少差異或加上熱交換器;有其他電子設(shè)備時(shí)斷開LC、檢測器和記錄儀,檢查干擾是否來自于外部,加以更正;泵振動(dòng)時(shí)在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器?！　』€噪音(不規(guī)則的)　　(1) 漏液：檢查接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要,更換密封,檢查流通池是否漏液?！　?2) 流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成：檢查流動(dòng)相的組成?！　?3) 流動(dòng)相各溶劑不相溶：選擇互溶的流動(dòng)相。　　(4) 檢測器/記錄儀電子元件的問題：斷開檢測器和記錄儀的電源,檢查并更正?！　?5) 系統(tǒng)內(nèi)有氣泡：用強(qiáng)極性溶液清洗系統(tǒng);檢測器內(nèi)有氣泡,清洗檢測器,在檢測器后面安裝背景壓力調(diào)節(jié)器?！　?6) 流通池污染(即使是極少的污染物也會產(chǎn)生噪音) :用硝酸清洗流通池;　　(7) 檢測器燈能量時(shí)不足更換燈;　　(8) 色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱?！　?9) 流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常:維修或更換混合器,在流動(dòng)相不走梯度時(shí),不建議使用泵的混合裝置。 【導(dǎo)讀】色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護(hù)色譜柱尤為重要，使用不當(dāng)就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個(gè)方面簡單

色譜柱在色譜儀分析系統(tǒng)中起著分離作用，是色譜分析的核心部件。正確使用和維護(hù)色譜柱尤為重要，使用不當(dāng)就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。以下從幾個(gè)方面簡單介紹液相色譜柱在使用過程中應(yīng)當(dāng)著重注意的問題。

一、避免壓力和溫度的急劇變化

溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行，以保持色譜柱內(nèi)填料的穩(wěn)定性。

二、避免直接改變?nèi)軇┑慕M成

在需要改變檢測樣品溶液組成是，應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。且在使用次洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗色譜柱時(shí)，對流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50~75ml。

三、避免色譜柱反沖

一般來說色譜柱不能反沖，只有色譜柱使用說明書上標(biāo)明該柱可反沖才可以反沖除去留在柱頭上的雜質(zhì)。否則，反沖色譜柱的影響是迅速降低柱效。

四、避免流動(dòng)相使用不當(dāng)而破壞固定相

選擇使用適宜的流動(dòng)相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一段預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

五、禁止樣品未經(jīng)處理直接進(jìn)入色譜柱

避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。

六、禁止將緩沖溶液長時(shí)間存放在色譜柱內(nèi)

保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時(shí)間。

七、禁止色譜柱未經(jīng)處理直接封存

色譜柱使用完成之后須使用相宜溶劑進(jìn)行清潔處理，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡；當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗；含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸；裝在液相色譜儀上的色譜柱如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4-5天開機(jī)沖洗15分鐘。

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