色譜柱是液相色譜儀的核心，在我們使用液相色譜儀的時候，保證液相色譜柱的柱效，延長色譜柱的使用壽命是很重要的事情，當我們使用的時候色譜柱如果出息壓力過高或者過低等問題都是屬于柱壓問題。液相色譜柱如果壓力過高是因為柱子里面產(chǎn)生了雜質，造成液體的流動力加大而所造成。下面為大家總結的幾個液相色譜柱的問題。　　1、流動相的前處理：　　流動相或楊平中雜質堵塞色譜柱進口濾片，導致壓力升高。這是由于流動相可能沒有過濾，或過濾不**，使固體雜質滯留于濾板上所致。另一個方面也可能沒有使用預保護柱所致。　　2、樣品的沉淀：　　當流動相與溶解樣品的溶劑不一致時，樣品進入色譜柱時，可能因溶解度降低而沉淀出來吸附于柱內(nèi)，造成壓力升高?！　?、晶體的析出：　　使用含有緩沖液的流動相時，緩沖液中的無機鹽可能會殘留在體系之中，它們會因在新流動相中的溶解度降低而析出阻塞而壓力升高。　　4、**或霉菌孳生：　　流動相中、管路中或柱子進口處繁殖、生長霉菌堵塞濾板，導致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時一般要現(xiàn)配現(xiàn)用。　　5、溶質吸附：　　一些溶質在色譜柱上有較強大的吸附力，洗脫時流動相也難以**掉，累積的未洗脫溶質也會造成阻力增大從而造成壓力升高?！　?、流動相更換過度較快：　　當改變流動相體系時，不**的更換使不同性質、互不混溶的流動相存在于同一個體系之中，也會造成壓力升高?！　?、壓力脈沖：　　運行過程中，有時會產(chǎn)生整個液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如泵壓力變化，此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的崩壞和柱床結構的微小變化，填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大，造成壓力升高?！　∫陨蠋追N出現(xiàn)壓升高的原因，下文提出的解決方法：　　處理對于緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi)的情況先用40～50℃的純水,低速正向沖洗柱子,待柱壓逐漸下降后,相應提高流速沖洗,柱壓大幅度下降后,用常溫純水沖洗,之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘；如果柱壓還是降不下來，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用?！　τ跇悠肺廴境练e的情況,由樣品的沉積引起污染的C18柱,和純水反向沖洗柱子,然后換成甲醇沖洗,接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時間的長短由樣品污染的情況而定),再用換成甲醇沖洗,然后用純水沖洗,***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。　　液相色譜柱壓過低的現(xiàn)象一般是由于色譜系統(tǒng)泄漏造成的，其處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可?！　×硗膺€有一中可能是柱壓不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體，原因就是泵里進了空氣?！　√幚矸椒ǎ捍蜷_Purge閥，用3-5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借助外力吸出氣泡。

異常的色譜峰指的是色譜圖中的無峰或出現(xiàn)負峰、寬峰、雙峰、肩峰、峰形不對稱等情況。一般來說，異常峰是實驗工作中較為棘手的問題。異常峰的出現(xiàn)會影響色譜分析的結果。通常情況下，峰型問題是由分離系統(tǒng)所決定的。在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰型，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待，從主要問題出發(fā)，一個一個加以解決。
 

　　1.色譜圖中未出峰
 

　　系統(tǒng)未進樣或樣品分解;泵未輸液或流動相使用不正確;檢測器設置不正確
 

　　2.一個峰或幾個峰是負峰
 

　　流動相吸收本底高;進樣過程中進入空氣;樣品組分的吸收低于流動相。
 

　　3.所有峰均為負峰
 

　　信號電纜接反或檢測器輸出極性設置顛倒;光學裝置尚未達到平衡。
 

　　4.所有峰均為寬峰
 

　　系統(tǒng)未達到平衡;溶解樣品的溶劑極性比流動相差很多;色譜柱尺寸及類型選擇不正確;色譜柱或保護柱被污染或柱效降低;溫度變化造成的影響。
 

　　5.所出峰比預想的小
 

　　樣品黏度過大;進樣品故障或進樣體積誤差;檢測器設置不正確.定量環(huán)體積不正確;檢測池污染;檢測器燈出現(xiàn)問題。
 

　　6.出現(xiàn)雙峰或肩峰
 

　　進樣量過大;樣品濃度過高;保護柱或色譜柱柱頭堵塞;保護拄或色譜柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
 

　　7.前伸峰
 

　　進樣量或樣品濃度高，溶解樣品的溶劑較流動相極性強;保護柱或色譜柱污染或失效。
 

　　①柱溫低：升高柱溫;②樣品溶劑選擇不恰當：使用流動相作為樣品溶劑;③樣品過載：降低樣品含量;④色譜柱損壞：更換柱子。
 

　　8.拖尾峰
 

　　柱超載，降低樣品量;增加柱直徑采用較高容量的固定相;峰干擾，對樣品進行清潔過濾;調整流動相;硅羥基作用，加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相pH值;柱內(nèi)燒結不銹鋼失效，更換燒結不銹鋼;加在線過濾器，對樣品進行過濾;死體積或柱外體積過大，將連接點降至谷值;盡可能使用內(nèi)徑較細的連接管;柱效下降，更換柱子;采用保護柱，對柱子進行再生。
 

　　9.出現(xiàn)平頭峰
 

　　檢測器設置不正確;進樣體積太大或樣品濃度太高。
 

　　10.出現(xiàn)鬼峰
 

　　進樣閥殘余峰，可能為上次樣品的殘余。在每次進完樣后用充足的時間來平衡和清洗系統(tǒng);樣品中存在未知物，改進樣品的預處理;流動相污染，更換新流動相，盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動相再次使用時要過濾;盡可能使用HPLC級試劑;流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除。
 

　　11.峰分叉
 

　　①保護柱或分析柱污染：取下保護柱再進行分析,如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞,拆下來清洗。如果問題仍然存在,可能是柱子被強保留物質污染,運用適當?shù)脑偕胧?。如果問題仍然存在,入口可能被阻塞,更換篩板或更換色譜柱。②樣品溶劑不溶于流動相改變樣品溶劑,如果可能采取流動相作為樣品溶劑。
 

　　12.峰變形
 

　　樣品過載，減少樣品載量。
 

　　13.早出的峰變形
 

　　樣品溶劑選擇不恰當 ①減少進樣體積 ②運用低極性樣品溶劑
 

　　14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
 

　　柱外效應 ①調整系統(tǒng)連接(使用更短、內(nèi)徑更小的管路) ②使用小體積的流通池
 

　　15.酸性或堿性化合物的峰拖尾
 

　　緩沖不合適①使用濃度50～100 mM的緩沖液②使用Pka等于流動相pH值的緩沖液
 

　　16.額外的峰
 

　　(1)樣品中有其他組分：正?，F(xiàn)象;
 

　　(2)前一次進樣的洗脫峰：①增加運行時間或梯度斜率②提高流速;
 

　　(3)空位或鬼峰：①檢查流動相是否純凈 ②使用流動相作為樣品溶劑 ③減少進樣體積。