問(wèn)題

原因

表現(xiàn)

不同色譜柱間差異使用期間柱變化

填料、鍵合相不同

柱床破壞

鍵合相丟失

硅膠基質(zhì)溶解

強(qiáng)保留組分堆積堵塞

保留因子(k), 分離因子(a）

柱效(N）

保留因子(k), 分離因子(a）

柱效(N)

保留因子(k), 柱效(N)

柱外效應(yīng)

系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測(cè)器之間的管路太長(zhǎng)、檢測(cè)器流通池體積大、接頭死體積大等。

柱效(N)

分離效果變差

流動(dòng)相組分改變

流速改變

溫度改變

保留因子(k)，柱效變化很小

保留因子(k), 分離因子(a)

保留因子(k), 柱效變化很小

柱平衡慢

重新平衡時(shí)間不夠

保留因子(k), 柱效變化很小

柱超載

樣品量太大

保留因子(k), 柱效(N)

    通用型反相色譜柱在使用前，***好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要留意：液相色譜柱柱性能可能由于所使用的樣品、活動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠(chǎng)測(cè)試所使用的條件是***佳條件），只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。

    通用型反相色譜柱樣品的前處理：

    a、***好使用活動(dòng)相溶解樣品。

    b、使用予處理柱除往樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。

    c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除往微粒雜質(zhì)。

    通用型反相色譜柱的保養(yǎng)：

    通用型反相色譜柱在使用前，***好進(jìn)行柱的性能測(cè)試，并將結(jié)果保存起來(lái)，作為評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。

    但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠(chǎng)測(cè)試所使用的條件是***佳條件)，只有這樣，測(cè)得的結(jié)果才有可比性。在對(duì)色譜柱使用前進(jìn)行測(cè)試以后，要根據(jù)不同的情況對(duì)色譜柱進(jìn)行保養(yǎng)：

    ①通用型反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。

    注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。

    ②長(zhǎng)期保存色譜柱：如色譜柱要長(zhǎng)時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對(duì)于反相柱可以?xún)?chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以?xún)?chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以?xún)?chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購(gòu)買(mǎi)新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度***好是室溫。

色譜柱安裝時(shí)需要注意的事項(xiàng) 　  色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。色譜柱可分為填充柱和開(kāi)管柱兩大類(lèi)。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤(pán)管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。下面介紹色譜柱安裝時(shí)需要注意的事項(xiàng)。

　　色譜柱的安裝：

　　1)將液相色譜裝置中的流動(dòng)相**置換后再連接色譜柱，并**排出流路內(nèi)的空氣。

　　裝置內(nèi)的液體和所使用的流動(dòng)相不能相溶的情況下，使用雙方都能相溶的液體做過(guò)渡。比如從水置換到氯仿的情況，就需要使用丙酮做過(guò)渡，才能**置換。

　　將鹽溶液置換成有機(jī)溶劑的時(shí)候，需要通過(guò)純水、丙酮的順序來(lái)進(jìn)行置換。相反，從有機(jī)溶劑轉(zhuǎn)換成鹽溶液的情況下，需要通過(guò)丙酮、純水的順序置換。

　　不僅僅是泵，流動(dòng)相流動(dòng)的所有流路都必須進(jìn)行置換。例如，注入樣品的情況，軟管內(nèi)的液體也需要置換。另外，如果使用壓力計(jì)等別的軟管的情況，取下來(lái)的管子也必須由流動(dòng)相洗凈后才能繼續(xù)使用。

　　2)色譜柱保存方法不對(duì)或者長(zhǎng)期不使用的情況下，色譜柱的出入口可能會(huì)有空氣殘留。這種情況下，必須先把空氣**排出后才連接到裝置中。

　　避免快速加熱，加熱溫度不要超過(guò)色譜柱的***高負(fù)荷溫度。

　　把柱子入口側(cè)的螺栓打開(kāi)，然后加溫(一般加溫到手心感到溫暖的程度就足夠了)，等液體滿(mǎn)出來(lái)以后接到裝置上。然后，打開(kāi)出口處的螺栓，用泵送液，等確認(rèn)出口處有液體流出后，連接到裝置中。這樣操作，就算后面再連接一根色譜柱也能**除去空氣。

　　3)在泵運(yùn)作的時(shí)候連接色譜柱。確保能讓流動(dòng)相按照色譜柱上箭頭的方向流動(dòng)的狀態(tài)連接色譜柱。

　　4)色譜柱加溫使用的時(shí)候，先用0.2～0.3mL/min的低流量一邊送液一邊升溫。達(dá)到所定溫度后，再漸漸的增加流量至測(cè)定流量。

　　5)色譜柱需要安定時(shí)間。連接到裝置中立即進(jìn)行測(cè)試的情況下，**次很難得到好的分析結(jié)果。