色譜柱日常維護
每天用足夠的時間來維護色譜柱,您將節(jié)省更多有利于處理色譜柱故障的時間,調(diào)試您的色譜柱的壽命也會變得更長,色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān),***主要的是與日常維護密切相關(guān)。色譜柱的使用壽命主要根據(jù)柱效和柱壓兩個指標(biāo)來衡量,如果一支色譜柱的柱效太低或者太高,通常被認(rèn)為該色譜柱的使用壽命已盡結(jié)束。因此,延長色譜柱的使用壽命關(guān)鍵是,**引起柱效下降和柱壓升高的因素,通過以下幾點幫戰(zhàn)您完成色譜柱的日常維護工作。
一、流動相的pH應(yīng)在使用范圍內(nèi)
以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱的pH范圍為2~9,流動相超過其pH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,壽命變短。
二、去除樣品和流動相匯總的固體顆粒
樣品和流動相中含有固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板,不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析前對樣品進(jìn)行針筒過濾,流動相過0.45um濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器
保護柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此除對樣品和流動相進(jìn)行過濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線過濾器。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽使用不當(dāng)會使其在流動相(含有機溶劑)中析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上的鍵合的碳鏈自由舒展,使用色譜柱的保留能力下降,柱效降低。
建議使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下:
1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需要過濾流動相1.0ml/min流速沖洗60min.
2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過濾流動相似1.0ml/min流速沖洗60min;分析完成后,再用該過濾流動以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
五、柱清洗方法:
1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。
2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先后用上述方法除去緩沖鹽,然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min。
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凝膠色譜技術(shù)是六十年代初發(fā)展起來的一種快速而又簡單的分離分析技術(shù),由于設(shè)備簡單、操作方便,不需要有機溶劑,對高分子物質(zhì)有很高的分離效果。
凝膠色譜法又稱分子排阻色譜法。凝膠色譜主要用于高聚物的相對分子質(zhì)量分級分析以及相對分子質(zhì)量分布測試。目前已經(jīng)被生物化學(xué)、分子生物學(xué)、生物工程學(xué)、分子免疫學(xué)以及醫(yī)學(xué)等有關(guān)領(lǐng)域廣泛采用,不但應(yīng)用于科學(xué)實驗研究,而且已經(jīng)大規(guī)模地用于工業(yè)生產(chǎn)。
那么,凝膠色譜柱應(yīng)該如何進(jìn)行清洗和存放呢?
1.色譜柱的清洗。
為了不使被測物質(zhì)和雜質(zhì)停留在色譜柱中,在每次的樣品分析工作完成之后,都應(yīng)及時地清洗色譜柱。首先要用對被測樣品洗脫能力強的溶劑來洗脫色譜柱,以分析工作中常用的反相色譜分析法為例,因其先流出的物質(zhì)是極性大的物質(zhì),此時應(yīng)用**的甲醇或使用異丙純、四氫呋喃等極性稍弱的溶劑將吸附在柱內(nèi)的極性小的物質(zhì)洗脫下來,洗脫液的用量一般為柱體積的20倍即可。如果流動相是緩沖溶液,則應(yīng)先用蒸餾水來沖洗色譜柱,以沖掉柱內(nèi)的鹽,然后再用合適的溶劑來沖洗。
2.色譜柱的存放。
如果色譜柱暫時不用,存放時要注意以下幾點:
a.幾天之內(nèi)的短期放置,凝膠柱則用蒸餾水來沖洗,再把色譜柱的兩頭用密封螺絲密封好即可。
b.如果色譜柱長期不用,僅用上述方法來處理就不行了,這時應(yīng)使用色譜柱使用說明書中所指明的溶劑來充滿色譜柱,凝膠柱則不能用水了,因柱內(nèi)如果有微生物的生長則會使柱效降低,此時應(yīng)用0.05%的NaNs水溶液(防腐劑)來沖洗色譜柱,再將色譜柱封嚴(yán)。色譜柱長期放置時,**要將色譜柱的兩端封嚴(yán),以防止由于溶劑揮發(fā)而造成的柱填料干縮現(xiàn)象,因這可導(dǎo)致柱效的嚴(yán)重降低。
c.色譜柱應(yīng)貯存在室溫下,如果放置于0℃以下的環(huán)境里,柱內(nèi)就會結(jié)冰,這也將導(dǎo)致柱效的降低。
色譜柱壓力過高或低的原因
色譜柱是**液相的心臟,在液相色譜儀的使用中,保持色譜柱的柱效、容量和滲透性,延長柱子的使用壽命是非常重要。色譜柱壓力過高、過低都屬于柱壓問題。色譜柱壓升高一般是由于柱床內(nèi)產(chǎn)生了雜質(zhì),造成流體阻力加大所致。下面大致總結(jié)為以下幾個方面: 1、流動相的前處理: 流動相或楊平中雜質(zhì)堵塞色譜柱進(jìn)口濾片,導(dǎo)致壓力升高。這是由于流動相可能沒有過濾,或過濾不**,使固體雜質(zhì)滯留于濾板上所致。另一個方面也可能沒有使用預(yù)保護柱所致?! ?i>2、樣品的沉淀: 當(dāng)流動相與溶解樣品的溶劑不一致時,樣品進(jìn)入色譜柱時,可能因溶解度降低而沉淀出來吸附于柱內(nèi),造成壓力升高。 3、晶體的析出: 使用含有緩沖液的流動相時,緩沖液中的無機鹽可能會殘留在體系之中,它們會因在新流動相中的溶解度降低而析出阻塞而壓力升高?! ?i>4、**或霉菌滋生: 流動相中、管路中或柱子進(jìn)口處繁殖、生長霉菌堵塞濾板,導(dǎo)致壓力升高。所以在使用磷酸鹽緩沖液時一般要現(xiàn)配現(xiàn)用?! ?i>5、溶質(zhì)吸附: 一些溶質(zhì)在色譜柱上有較強大的吸附力,洗脫時流動相也難以**掉,累積的未洗脫溶質(zhì)也會造成阻力增大從而造成壓力升高?! ?i>6、流動相更換過度較快: 當(dāng)改變流動相體系時,不**的更換使不同性質(zhì)、互不混溶的流動相存在于同一個體系之中,也會造成壓力升高?!?i> 7、壓力脈沖: 運行過程中,有時會產(chǎn)生整個液相色譜儀系統(tǒng)內(nèi)壓力的突然升降。如泵壓力變化,此所形成的壓力脈沖會造成多孔填料的崩壞和柱床結(jié)構(gòu)的微小變化,填料微屑的長期積累也可能會使柱床阻力增大,造成壓力升高。
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