色譜柱日常維護 每天用足夠的時間來維護色譜柱,您將節(jié)省更多有利于處理色譜柱故障的時間,調(diào)試您的色譜柱的壽命也會變得更長,色譜柱的使用壽命,除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān),zui主要的是與日常維護密切相關(guān)。色譜柱的使用壽命主要根據(jù)柱效和柱壓兩個指標(biāo)來衡量,如果一支色譜柱的柱效太低或者太高,通常被認為該色譜柱的使用壽命已盡結(jié)束。因此,延長色譜柱的使用壽命關(guān)鍵是,**引起柱效下降和柱壓升高的因素,通過以下幾點幫戰(zhàn)您完成色譜柱的日常維護工作。一、流動相的pH應(yīng)在使用范圍內(nèi)以硅膠為基質(zhì)的反相色譜柱的pH范圍為2~9,流動相超過其pH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂,使柱效下降,壽命變短。
二、去除樣品和流動相匯總的固體顆粒樣品和流動相中含有固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板,不僅會引起柱壓的升高,而且也會引起柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析前對樣品進行針筒過濾,流動相過0.45um濾膜。
三、使用保護柱或在線過濾器保護柱和在線過濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱篩板孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此除對樣品和流動相進行過濾外,建議您在色譜柱進樣端加上保護柱或在線過濾器。
四、正確使用緩沖鹽緩沖鹽使用不當(dāng)會使其在流動相(含有機溶劑)中析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結(jié),柱壓上升;同時阻礙了基質(zhì)上的鍵合的碳鏈自由舒展,使用色譜柱的保留能力下降,柱效降低。
建議使用前要過濾,使用后要沖洗。具體方法如下: 1、等度條件:使用緩沖鹽前和使用后需要過濾流動相1.0ml/min流速沖洗60min. 2、梯度條件:用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前,用與初始流動相組成相同的過濾流動相似1.0ml/min流速沖洗60min;分析完成后,再用該過濾流動以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩,以避免梯度過程中緩沖鹽析出。
五、柱清洗方法: 1、未使用緩沖鹽:每天分析完成后,用純甲醇或純乙腈反向沖洗色譜柱60min。 2、使用過緩沖鹽:分析完成后,先后用上述方法除去緩沖鹽,然后再用純甲醇或乙腈反向沖洗色譜柱60min。
色譜柱在使用過程中易出現(xiàn)的問題和解決辦法色譜柱在使用中***常見的問題就是柱壓升高,如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加,屬于正常現(xiàn)象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統(tǒng)管路堵塞及壓力傳感器故障除外,可能的原因有如下幾點: 1、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染; 2、色譜柱頭的填料被樣品污染; 3、色譜柱內(nèi)緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑,形成結(jié)晶析出; 4、流動相ph值過大或過小使固定相結(jié)構(gòu)破壞或溶解。 解決辦法如下: 1、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染,可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力,或者卸下色譜柱頭,將其放在10%的稀硝酸內(nèi)超聲清洗10分鐘,后再用純水超聲10分鐘,重新裝入色譜柱?! ?、如確定色譜柱頭的填料被污染,將柱頭螺絲卸下,挖出柱內(nèi)前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔細修復(fù)后,重新安裝上柱頭螺絲?! ?、如確定定是鹽結(jié)晶,用10%的甲醇/水沖洗色譜柱使柱內(nèi)鹽**溶解,再換高濃度甲醇?! ?、如果因ph值使用不當(dāng),很難恢復(fù)。