一套液相色譜系統(tǒng)大致分為以下幾個部分：流動相前處理部分、輸液部分、進(jìn)樣部分、分離部分、檢測部分?！　∫?、流動相前處理　　流動相前處理主要包括過濾和脫氣，使用設(shè)備主要為溶劑過濾器、真空泵和超聲波?！　?、過濾。HPLC所用流動相必須預(yù)先過濾和脫氣，過濾的作用是防止顆粒性的雜質(zhì)堵塞系統(tǒng)，或影響單向閥的正常工作。過濾時需要注意濾膜的選擇，油膜和水系膜必須分開使用。水膜易有機(jī)溶劑溶解而進(jìn)入系統(tǒng)導(dǎo)致泵流路和色譜柱頭的堵塞?！　?、超聲。超聲的作用是去除流動相中的氣泡。超聲時間一般在20min即可。超聲后，液體溫度會升高，應(yīng)冷卻到室溫再使用。超聲后的流動相若需隔天使用再次超聲。　　二、輸液系統(tǒng)　　輸液系統(tǒng)即是指高壓恒流泵，其作用是能提供穩(wěn)定準(zhǔn)確的流速?！　?、溶劑過濾頭。吸液過濾頭，或稱沉子，主要作用是過濾流動相中可能存在的顆粒性雜質(zhì)。長時間使用后，雜質(zhì)有可能阻塞溶劑過濾頭上的過濾板孔隙；或長時間使用緩沖液，過濾頭表面容易產(chǎn)生一層膜，阻礙流動相正常通過。嚴(yán)重時，即使是已超聲過的溶劑，泵吸液時也會有氣泡在四氟輸液管里產(chǎn)生，因此應(yīng)經(jīng)常對過濾頭進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇或者30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理?！　?、單向閥。單向閥的作用是確保液體向一個方向流動，是高壓恒流泵穩(wěn)定輸液的保證。日常使用過程中，可以通過觀察壓力的情況，初步判斷流量是否正常。如果系統(tǒng)已經(jīng)平衡一段時間，壓力應(yīng)該是穩(wěn)定的。但如果壓力存在波動，則表明流量不穩(wěn)定；如果無壓力，則表明無流量。這兩種情況大多是因為單向閥里混入了氣泡或雜質(zhì)?；烊霘馀莸那闆r，應(yīng)把放空閥打開，按沖洗鍵將里面的氣泡排出。單向閥混入雜質(zhì)的情況，須對其進(jìn)行清洗。清洗溶劑可以選擇乙醇，安裝時注意標(biāo)記環(huán)的方向。 單向閥裝配圖及剖面圖 1 帶標(biāo)記環(huán)閥外套；2 陶瓷座；3 寶石球；4 帶密封墊限位套；5 密封墊　　3、密封圈。密封圈是固定在柱塞桿上防止泵腔內(nèi)的液體泄漏，是保證泵頭輸液正常的關(guān)鍵部件。但柱塞桿和柱塞密封圈長期使用會發(fā)生磨損，主要與流量、操作壓力和所使用的流動相有關(guān)。當(dāng)使用含鹽的流動相時，由于脫水或蒸發(fā)，可能形成鹽結(jié)晶，而泵運動時鹽結(jié)晶會導(dǎo)致密封圈和柱塞桿的磨損。因此，每天實驗前和實驗后都需用純水沖洗一次密封圈(在柱塞密封圈和二級密封圈之間)，保持清洗管內(nèi)有水以防止形成晶體，延長柱塞桿和密封圈的使用壽命。 等度系統(tǒng) 梯度系統(tǒng) 柱塞桿清洗連接示意圖　　4、在線過濾器。為了防止由于流動相雜質(zhì)微粒進(jìn)入色譜系統(tǒng)，泵在放空閥內(nèi)安裝了在線過濾器，經(jīng)泵出口流出的液體通過在線過濾器，經(jīng)排空管流出的液體不通過在線過濾器。儀器使用**時間后，建議用戶清洗在線過濾器的燒結(jié)不銹鋼過濾片。用扳手卸下壓帽，將密封環(huán)和燒結(jié)不銹鋼過濾片一同取出清洗，清洗后按原位裝上。清洗溶劑可以選擇30%稀硝酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭的烘干處理?！　∪⑦M(jìn)樣系統(tǒng)　　進(jìn)樣系統(tǒng)分為手動進(jìn)樣閥和自動進(jìn)樣器?！　?、手動進(jìn)樣閥。對于手動進(jìn)樣閥使用過程中需要注意每個樣品進(jìn)樣完成后應(yīng)對進(jìn)樣閥進(jìn)行清洗，防止殘留對下一個樣品分析的影響。還需要注意進(jìn)樣方式，以20μL定量環(huán)為例，我們可以選擇**充滿定量管或部分充滿定量管。為了保證進(jìn)樣的重復(fù)性，選擇**充滿定量管進(jìn)樣方式時，需要注入定量環(huán)體積3倍以上的樣品；選擇部分充滿定量管進(jìn)樣方式時，進(jìn)樣體積應(yīng)在定量管體積一半以下，即1-10μL?！　?、自動進(jìn)樣器。如果采用自動進(jìn)樣器進(jìn)樣，首先需要保證注射器里面沒有氣泡存在，否則影響進(jìn)樣量準(zhǔn)確性；其次是樣品瓶里面有足夠的樣品，保證進(jìn)樣針能夠吸到樣品。為了避免交叉污染需要定期對樣品瓶、蓋和墊進(jìn)行清洗。若自動進(jìn)樣器長時間不使用，應(yīng)該注意：腐蝕性的流動相或洗液(例如，堿性或酸性緩沖溶液)必須**從系統(tǒng)中置換出來。同時，為了避免**的生長，應(yīng)將一個樣品瓶中充滿甲醇，并重復(fù)幾次進(jìn)樣操作?！　∷摹⒎蛛x系統(tǒng)　　分離系統(tǒng)包括色譜柱、保護(hù)柱以及柱溫箱?！　?、色譜柱。色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細(xì)閱讀說明書，了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護(hù)方法等事項。色譜柱使用完后，需及時對色譜柱進(jìn)行沖洗。沖洗完成后，應(yīng)該將色譜柱從儀器上拆下來，兩端用廠家配的堵頭密封后，保存在色譜柱盒里?！　?、保護(hù)柱。保護(hù)柱的作用主要是防止吸附性強(qiáng)的雜質(zhì)對色譜柱污染，從而延長色譜柱的壽命。針對不同型號的色譜柱，應(yīng)選擇相對應(yīng)填料的保護(hù)柱。應(yīng)注意柱芯也是有壽命的，應(yīng)該定期進(jìn)行更換?！　?、柱溫箱。色譜柱溫度變化，可能會導(dǎo)致保留時間的變化。為了避免這個問題，建議使用柱溫箱?！　∥濉z測系統(tǒng)　　HPLC常用的檢測器是紫外檢測器。在日常使用過程中紫外檢測器主要需要注意檢測池和氘燈的使用與維護(hù)?！　?、檢測池。檢測池長時間使用可能會造成污染，如果儀器的參比能量(REF ENERGY)正常，測量能量(SMP ENERGY)偏低，可能為檢測池污染導(dǎo)致，可以對檢測池進(jìn)行清洗。對檢測池零件的進(jìn)行清洗，一般先采用約1：4的硝酸溶液超聲清洗，分別用純水和甲醇溶液清洗，然后重新組裝并將檢測池池體推進(jìn)池腔內(nèi)，擰緊池板螺絲。注意組裝中，池玻璃及墊片**要放正，以免壓碎池玻璃，造成檢測池泄漏?！　?、氘燈。氘燈正常使用壽命可在1500小時以上。燈的使用壽命與檢測器的使用時間和開啟頻率有關(guān)，因此使用過程中應(yīng)盡量節(jié)省不必要的開機(jī)時間，減少開關(guān)頻率，以延長氘燈的使用壽命。如果準(zhǔn)確地判斷出氘燈已經(jīng)不能點亮或能量太低，則需要更換新的氘燈。在購買氘燈時，應(yīng)注意咨詢和核對氘燈的型號與儀器型號是否匹配。更換到氘燈時，參照儀器說明書中的相關(guān)內(nèi)容，特別要注意氘燈連接線的位置順序。 液相色譜儀的日常維護(hù)與注意事項

　　液相色譜儀的日常維護(hù)與注意事項

　　一、日常維護(hù)：

　　1.定期清洗單向閥：將單向閥卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲，10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。

　　2.定期清洗吸濾頭：將吸濾頭卸下，一般先用純凈水超聲10分鐘，然后用異丙醇超聲10分鐘；也可直接用異丙醇超聲10分鐘。

　　3.定期沖洗檢測池：把色譜柱卸下，在流速1.0ml/min的狀態(tài)下先用純凈水沖洗30分鐘，然后再用30%

　　磷酸（色譜級）沖洗30分鐘左右，再用超純水沖洗至流出液為中性，***后用甲醇沖洗，待用。

　　二、注意事項：

　　1.開始進(jìn)樣前30分鐘開氘燈即可，節(jié)約燈的能量和使用時間。

　　2.流動相的使用和注意事項：

　?、偎昧鲃酉啾仨氼A(yù)先濾過和脫氣，流動相一般貯存于玻璃不銹鋼容器內(nèi)。貯存容器**要蓋嚴(yán)，防止溶劑揮發(fā)引起組成變化。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉，應(yīng)盡量新鮮配制使用，不要長期貯存。容器應(yīng)定期清洗，特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子，以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。

　?、谂渲屏鲃酉嘤盟铻橥薰萍儍羲蚪?jīng)超聲過濾后的純化水，流動相配制好后先用直徑為5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜，通過沙芯過濾器的過濾，然后在超聲儀上超聲。

　　③不得將裝流動相的容器直接放置與超聲儀內(nèi)，需放與篩網(wǎng)上進(jìn)行超聲。

　　3.六通閥的使用和維護(hù)注意事項：

　?、贅悠啡芤哼M(jìn)樣前必須用濾膜過濾，以減少微粒對進(jìn)樣閥的磨損。

　　②轉(zhuǎn)動閥芯時不能太慢，更不能停留在中間位置，否則流動相受阻，使泵內(nèi)壓力劇增，甚至超過泵的**壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位時，過高的壓力將使柱頭損壞。

　?、蹫榉乐咕彌_鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。通?？捎盟疀_洗，或先用能溶解樣品的溶劑沖洗，再用水沖洗。

　　4.色譜柱柱壓升高的主要因素：

　?、貺C-10AT/20AT/10ATPlus泵的單向閥堵塞。

　?、谏V柱的入口篩板堵塞。

　?、畚鼮V頭堵塞。

　　④PEEK管接口處堵塞。

　　5.色譜柱柱壓不穩(wěn)的因素：

　?、俦脙?nèi)有空氣。

　?、诒妹芊鈮|損壞。

　?、廴軇┲械臍馀?。

　?、芟到y(tǒng)檢漏，找出漏點。

　　6.樣品峰保留時間漂移的主要因素：

　?、偈覂?nèi)溫度變化過大。

　?、诹鲃酉喑煞职l(fā)生變化。

　?、凵V柱未平衡好。

　?、鼙弥杏袣馀荨?/p>

　?、菰摿鲃酉嗍欠襁m宜此樣品的檢測。

　　7.基線漂移的主要因素：

　?、僦鶞夭▌印?/p>

　?、诹鲃酉嗖痪鶆?。

　?、哿魍ǔ乇晃廴净蛴袣怏w。

　?、軝z測器出口阻塞。

　　⑤流動相配比不當(dāng)或流速變化。

　?、蘖鲃酉辔廴尽⒆冑|(zhì)。

　?、呤褂醚h(huán)溶劑。

　　8.檢測器靈敏度不夠的主要因素：

　　①樣品進(jìn)樣量不足。

　?、诓ㄩL設(shè)置不正確。

　　③檢測器池窗污染。

　　④檢測池中有氣泡。

　?、蓦妷翰环€(wěn)。

　?、蘖鲃酉嗔魉俨缓线m。

　　9.色譜柱的使用和維護(hù)注意事項：

　?、俦苊鈮毫蜏囟鹊募眲∽兓?*機(jī)械震動。柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。

　　②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)?*是水，反之亦然。

　?、垡话阏f來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。

　　④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞。

　?、荼苊鈱?fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。

　　⑥經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱，**保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。

　?、弑４嫔V柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。**禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置至次日或更長時間。

　?、嗌V柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。

　?、嵋怨枘z為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。每次分析檢測完成后，***好用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。

　　10.樣品必須用直徑為2.5cm，孔徑為0.45ｕm的濾膜針式過濾。如有明確要求需用離心過濾的，經(jīng)離心過濾后取上清液即可。