【***** 維修保養(yǎng)】導(dǎo)讀：液相色譜儀是一種常用的專業(yè)檢驗(yàn)檢測儀器，在使用過程中難免會(huì)遇到一些故障，這需要相應(yīng)的辦法來解決。液相色譜的常見故障及解決方法　　液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來?！　　　?、HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？　　　?、贅悠妨坎蛔?，解決辦法為增加樣品量　　　?、跇悠肺磸闹又辛鞒?。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子　　　?、蹣悠放c檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器　　　?、軝z測器衰減太多。調(diào)整衰減即可?！　　　、輽z測器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)　　　?、迿z測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。　　　?、邫z測池中有氣泡。解決辦法為排氣?！　　　、嘤涗泝x測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。　　　?、崃鲃?dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可?！　　　、鈾z測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線?！　　　?、液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？　　　?、俸Y板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子?！　　　、诖嬖诟蓴_峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子　　　?、劭赡苤d，減少進(jìn)樣量?！　　　?、為何出現(xiàn)峰展寬？　　　?、贅悠敷w積過大——用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于*峰的15%　　　?、谠谶M(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展——進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散　　　?、蹟?shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢——設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)　　　?、軝z測器時(shí)間常數(shù)過大——設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣*峰半寬的10%　　　　⑤流動(dòng)相粘度過高——增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相　　　?、迿z測池體積過大——用小體積池,卸下熱交換器　　　?、弑Ａ魰r(shí)間過長——等度洗脫時(shí)增加強(qiáng)溶劑含量,也可用梯度洗脫　　　　⑧柱外體積過大——將連接管徑和連接管長度降至zui小　　　?、針悠愤^載——進(jìn)小濃度小體積樣品　　　　4、如何簡單判斷比例閥是否內(nèi)漏？　　　　設(shè)定泵使用一個(gè)單獨(dú)通路（A），打開Purge閥，流速5mL/min，提起其他溶劑瓶內(nèi)的溶劑過濾頭直至離開液面，觀察這些通路（B、C、D）內(nèi)的溶劑是否隨著流動(dòng)，正常時(shí)均不應(yīng)流動(dòng)?！　　　?、做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，如何解決？　　　　①泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是**泵內(nèi)空氣，對溶劑進(jìn)行脫氣處理；　　　?、诒壤y失效，更換比例閥即可；　　　?、郾妹芊鈮|損壞，更換密封墊即可；　　　?、苋軇┲械臍馀?，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；　　　?、菹到y(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；　　　　⑥梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的?！　　　?、購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時(shí)柱壓過高，請問為什么？　　　　柱壓過高是HPLC柱用戶zui常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因：　　　?、俨鹑ケＷo(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；　　　?、诎焉V柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；　　　　③將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；只用于使用過的柱子?！　　　、芨鼡Q柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題?！　　　?、色譜柱中的流動(dòng)相會(huì)排干嗎？　　　　不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。　　　　相比之下，另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不**就不可救藥了?？梢試L試用一種**脫氣的、表面張力低的溶劑（如，經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被**浸潤，恢復(fù)到正常狀態(tài)?！　　　?、除了在線脫氣，常用的實(shí)驗(yàn)室脫氣方式還有哪些？　　　　加熱回流脫氣，脫氣效果zui佳，但無法保持；氦脫氣，此方法脫氣***，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價(jià)格太貴，所以用的不多；真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發(fā)損失；超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但在實(shí)驗(yàn)室中zui常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。 液相色譜儀進(jìn)樣閥門的清洗 進(jìn)樣閥在進(jìn)樣過程中，必須是非常清潔的，否則得不到較好的結(jié)果。進(jìn)樣閥切換到進(jìn)樣位置(Inject)后，要在此位置保持一段時(shí)間，使流動(dòng)相充分沖洗樣品定量管，這樣可以保證有較高的**度，而且不用另外再?zèng)_洗樣品定量管。這種由色譜儀器控制的沖洗顯然要比手動(dòng)沖洗更好些。注意：沖洗需要的流動(dòng)相體積至少為所進(jìn)樣品體積的10倍。例如，如果取20μL樣品至100μL樣品定量管中，而流動(dòng)相此時(shí)的流速為1mL/min，則需要在進(jìn)樣位置至少保持12s，即：20μL×10/1000μL·min-1=0.2min=12s。

當(dāng)樣品定量管經(jīng)過充分的沖洗后，可以將旋柄轉(zhuǎn)回取樣位置(Load)，也可以繼續(xù)保持在進(jìn)樣位置，到下次取樣前才切換回取樣位置。在切換回取樣位置時(shí)，將樣品進(jìn)樣針或微量樣品進(jìn)樣針從進(jìn)樣閥中拔出。

為防止交叉污染，正常情況下不必每次進(jìn)樣后都沖洗進(jìn)樣閥注射針導(dǎo)入口。進(jìn)樣閥內(nèi)根據(jù)**設(shè)計(jì)的直接連接進(jìn)樣孔，可以使注射針頭的前端直接連接到樣品定量管的末端，沒有其他空間供樣品殘留。這樣在下一次進(jìn)樣時(shí)，就不會(huì)有上一次殘留的樣品進(jìn)入樣品定量管。

但是在進(jìn)樣針頭插入或拔出過程中，會(huì)有痕量的樣品沉積在針頭密封區(qū)域。精密的測定顯示這種殘留有1nL ~ 10nL。這表明進(jìn)20μL樣品，會(huì)殘留0.005% ~ 0.05%。每次進(jìn)樣后沖洗注射針導(dǎo)入口可以將此殘留沖洗干凈。沖洗注射針導(dǎo)入口的過程為：設(shè)定流動(dòng)相的流速為0.1mL/min ~ 1mL/min，將注射針導(dǎo)入口沖洗頭(Rheodyne部件號(hào)7125-054)連接到一只體積相對較大的注射器上，用大量的流動(dòng)相只在進(jìn)樣位置清洗注射針導(dǎo)入口。這樣進(jìn)入進(jìn)樣閥中的液體繞過樣品定量管由樣品溢出管5# 口排出。這一過程可以將注射針導(dǎo)入口、引導(dǎo)管、注射針導(dǎo)入管和注射針密封圈**清洗。而采用注射器**插入式的沖洗方式，則不能**清洗上述部分的表面。在取樣位置將注射針插入注射針導(dǎo)入口時(shí)，針頭推動(dòng)注射針密封圈內(nèi)少量樣品液體(上一次沖洗注射針導(dǎo)入管留下的)進(jìn)入樣品定量管。當(dāng)該樣品液體與所用的流動(dòng)相組成不同，且同時(shí)采用部分充滿定量管進(jìn)樣方式時(shí)，在高靈敏度的檢測器上可能出現(xiàn)怪峰。所以沖洗注射針時(shí)***好用流動(dòng)相沖洗。