【***** 維修保養(yǎng)】色譜作為一種分離技術(shù)與方法，自本世紀初起已經(jīng)有100多年的歷史了，現(xiàn)在已經(jīng)成為分析化學學科中的一個重要的分支。在人類進入新時代之際，人們面臨著在信息科學、生命科學、材料科學、環(huán)境科學等領(lǐng)域的快速發(fā)展的挑戰(zhàn)，在這些領(lǐng)域人才的需求成為國家高度發(fā)展的至關(guān)重要的因素。而色譜技術(shù)是生命科學、材料科學、環(huán)境科學必不可少的手段和工具。根據(jù)近的統(tǒng)計在全世界各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營銷總額占25%-30%?！　】茖W技術(shù)的發(fā)展，使得色譜技術(shù)也得到進一步的發(fā)展，不斷有新的聯(lián)用的技術(shù)得到應(yīng)用。生物醫(yī)學的發(fā)展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對研究的對象進行定性和定量的研究。　　1 色譜柱的相關(guān)性質(zhì)　　1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀?！　?.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡單而言：常見的分配住填料：碳十八柱(ODS/C18)、碳八柱(Octy了/C8)、碳六柱(Hexyl/C6)、碳四柱(Butyl/C4)、碳一注(Methyl/C1)、陰離子交換柱(SAX)、陽離子交換柱(SCX)、苯基柱(Phenyl)、氨基柱(Amino/NH2)、氰基柱(Cyano/CN/Nitrile)。常見的吸附柱填料：硅膠柱?！　∩V柱的選擇會直接影響混合物中組分的分離。舉例來講：對于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長的限制，分離能力有限，主要應(yīng)用于簡單化合物的分離?！　? 色譜柱的維護與保養(yǎng)　　2.1 色譜柱的維護。我們在使用新的色譜柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時常對色譜柱進行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象，造成這種現(xiàn)象的主要原因是　　①溶劑中的不溶物　　②樣品中的不溶物　?、郾眠M樣器等中的不溶物　　④柱內(nèi)不溶物的形成等。　　如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進行修復(fù)，首先，使用含鹽緩沖液后(如離子對試劑)應(yīng)用溶解性強的溶劑(如水)進行沖洗。其次，先斷開檢測器，然后用對來自樣品中的物質(zhì)有強溶解性的溶劑進行沖洗，對于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù)，色譜柱壓力還是沒有下降，則要斷開檢測器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩(wěn)定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速沖洗一小時。如果壓力不下降，則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞，如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換，若進口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被**恢復(fù)，只能通過去掉進口端的部分填料，重新填充進行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm?！　?.2 色譜柱的保養(yǎng)。　　色譜柱在使用前，好進行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是佳條件)，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進行測試以后，我們要根據(jù)不同的情況對色譜柱進行保養(yǎng)：　　①反相色譜柱每天實驗后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。　?、陂L期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞)中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度好是室溫?！　「爬ㄆ饋砭褪牵骸　、僦釉?*情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動；　?、诋斨雍蜕V儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路**要清洗干凈；　　③要注意流動相的脫氣；　　④避免使用高粘度的溶劑作為流動相；　　⑤進樣樣品要提純；　?、迖栏窨刂七M樣量；　?、呙刻旆治龉ぷ鹘Y(jié)束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品；　　⑧每天分析測定結(jié)束后，都要用適當?shù)娜軇﹣砬逑粗?；　　⑨若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當有機溶劑保存并封閉?！　? 色譜柱的維護與保養(yǎng)在高壓液相色譜中的應(yīng)用　　液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點而被廣泛應(yīng)用于生物化學、**及臨床分析。液相色譜柱是消耗品，會隨使用時間或進樣的次數(shù)增加，出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰，柱效下降。需要定期進行**清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：　　3.1 反相柱 分別用甲醇:水=90:10，純甲醇(HPLC級)，異丙醇(HPLC級)，二氯甲烷(HPLC級)等溶劑作為流動相，依次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗?！　?.2 正相柱 分別用正己烷(HPLC級)，異丙醇(HPLC級)，二氯甲烷(HPLC級)，甲醇(HPLC級)等溶劑做流動相，順次沖洗，每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大，可降低流速，避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，所有的流動相必須嚴格脫水?！　?.3 離子交換柱 長時間在緩沖溶液中使用和進樣，將導致色譜柱離子交換能力下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生?！　×硗猓€可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了，可以調(diào)回來，但可能會造成柱內(nèi)擔體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱?！　〖訌娚V柱的維護與保養(yǎng)對于色譜柱高壓液相色譜中應(yīng)用有著重要的意義，制定色譜柱管理的標準操作規(guī)程并嚴格執(zhí)行。每一根新購進的色譜柱必須造冊登記，內(nèi)容包括：生產(chǎn)公司、品名、型號、規(guī)格、購進時間、啟用時間、單價、柱內(nèi)保護溶液等。色譜柱分類存放，硅膠柱、化學鍵合硅膠柱、氰基或氨基柱、離子交換樹脂柱、凝膠柱各用一個色譜柱盒，盒上貼上標簽，注明類別。隨柱說明書裝入密實袋附在登記本上。每啟用一根色譜柱，在色譜柱上貼上標簽，注明啟用日期。每根柱子每兩個月保養(yǎng)一次，特別是對于一些使用頻率少的柱子，因為放置時間長，容易干柱，每一次做好保養(yǎng)記錄。對于確已失效的柱子，做好停用記錄，不能隨意丟棄，專門存放，如果現(xiàn)用的柱子的填料需要填補，可以用存放的柱子的填料。在從事生產(chǎn)的單位的質(zhì)檢部門，對于使用時間較長柱效降低的柱子，可把它用于檢測產(chǎn)品的中間體。 液相色譜柱的維護誤區(qū) 　　1.色譜柱的流向不能改變

　　在我們常規(guī)思維中，色譜柱上標示的流向是不可改變的，每次使用都要遵循。可是，大家有沒有想過這個方向的作用是什么呢？為什么要標示一個使用方向呢？

　　其實色譜柱前后端的填料及填裝工藝都是一樣的，標示方向的目的就是讓我們在使用中記住流動相從哪個方向流入色譜柱，那么這個流入段就是***先污染端。這樣就為我們?nèi)蘸缶S護或再生色譜柱做了準備，而我們需要遵循這個規(guī)定應(yīng)該在色譜柱開始做樣后。

　　我曾將已經(jīng)污染過的色譜柱反方向來使用，如果保留時間不是很長，而色譜柱足夠長，還是能使用一段時間的。

　　2.不去看說明書，直接就上機使用

　　色譜柱內(nèi)部保存著什么溶劑**要看清楚，因此色譜柱的說明書**要看清楚，當然也包括說明書上建議的維護保養(yǎng)規(guī)定，對我們都非常的有用。對于反相柱來說，溶劑基本就是乙腈或甲醇。但正相柱就不同了，因為正相柱除了可以適用正相系統(tǒng)，也可以適用反相系統(tǒng)，因此**要看清楚，對于你的方法來說是否需要置換色譜柱內(nèi)部保存溶劑。

　　3.用純水沖洗色譜柱才能把緩沖液沖洗干凈

　　使用強溶劑沖洗色譜柱對內(nèi)部填料的損傷是**的，尤其是純水，除非你的色譜柱是耐水的。沖洗色譜柱***好的方法是用流動相比例的水系和有機系來沖洗。如果你認為流動相比例無法把色譜柱沖洗干凈或者此比例中有機系占有比例過大，你可以使用內(nèi)含10%左右的純水來沖洗。

　　4.保存在乙腈或甲醇中的新色譜柱可以直接使用

　　理論上液相色譜柱不同于氣相色譜柱需要活化，但是由于液相色譜柱內(nèi)部保存的有機系具有揮發(fā)性，因此在使用前還是應(yīng)該用小流速的和色譜柱內(nèi)部相同的溶劑沖洗**的時間。可以是0.5ml/min，120min，但***好咨詢廠家，根據(jù)色譜柱參數(shù)設(shè)定。

　　5.色譜柱應(yīng)該保存在純乙腈或甲醇中

　　根據(jù)第4條，色譜柱內(nèi)部保存液具有揮發(fā)性，因此為了減少其揮發(fā)速度，可以添加5%-10%的水，這樣的話可以在**程度上減少一些有機系的揮發(fā)。如果再增加一個保險，我們可以在堵緊堵頭后，再用封口膜封起來。同樣道理，色譜柱一段時間不用后，也應(yīng)該按照第4條，進行小流速的沖洗色譜柱。

　　6.色譜柱污染后把篩板卸下來超聲清洗

　　對于色譜柱的污染，首當其沖的就是篩板，因此我們***常用的做法就是把柱頭卸下來，把篩板拿去超聲清洗。但是我們在拆卸過程中對色譜柱前端填料的損害遠遠大于污染照成的傷害，因為我們不是專業(yè)的。因此建議這一步能不做就不做。

　　7.自己填裝色譜柱

　　和第6條相同，這一步做法幾乎可以把此色譜柱判死刑了，我們的填裝工具有什么呢？就是手工的，其填裝壓力遠遠小于工廠內(nèi)原始的填裝壓力。那么我們填裝的結(jié)果會是個什么樣也就很明顯了。

　　在我看來，自己填裝也就是練練手，熟悉一下這個過程，要把色譜柱維修好的可能性幾乎為零。

　　8.用異丙醇沖洗再生后，柱子效果更差了

　　這種情況我自己就遇到過，還好那根柱子本來就打算報廢了，因此也沒有照成多少損失。但是這是什么原因呢？其實很簡單，就是在我反向沖洗前沒有把管路中的污染物沖洗干凈就直接接了柱子。所以說，方法是沒有錯的，色譜柱受污染時，我們應(yīng)該先想到儀器也污染了！