液相色譜儀是屬于易學(xué)難用的儀器，特別講究“正確使用”和經(jīng)驗(yàn)。液相工作者接觸zui多的是流動(dòng)相，也就是流動(dòng)相，是造成液相色譜各種問題的zui主要源頭。做好液相色譜儀的正確操作，能**的降低故障率，減少維修和停機(jī)成本。下面就來說一說在液相色譜儀使用中的注意事項(xiàng)?！　∫弧⒈檬且合嗌V儀的心臟。處于良好工作狀態(tài)的泵，基線平穩(wěn)，保留時(shí)間重現(xiàn)性好，梯度洗脫時(shí)壓力變化緩慢而且平穩(wěn)。泵的使用要注意：　　1.選擇的溶劑和試劑，在進(jìn)入儀器前用 0.45um 膜過濾，并進(jìn)行脫氣處理?！　?.泵開始使用時(shí)，**要用合適的流動(dòng)相**清洗干凈。　　3.定期檢查并更換在線過濾片及有關(guān)的墊圈，經(jīng)常清洗進(jìn)液處的微孔濾頭?！　?.改變流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)注意沉淀的產(chǎn)生，以防止泵堵塞?！　《?、液相色譜法對(duì)色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。所以說色譜柱的正確使用和維護(hù)**重要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，要注意下列問題，以維護(hù)色譜柱?！　?.避免壓力和溫度的急劇變化及**機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況。因此在安裝時(shí)要輕拿輕放?！　?.色譜柱PH使用范圍是2.0-9.0。當(dāng)使用PH值范圍邊界時(shí)，分析結(jié)束立即用與所使用流動(dòng)相互溶的溶劑**清洗置換流動(dòng)相?！　?.每次分析結(jié)束后，都要對(duì)色譜柱進(jìn)行沖洗。每次工作完后，用洗脫能力強(qiáng)的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動(dòng)相時(shí)，使用完后應(yīng)用無鹽流動(dòng)相沖洗?！　?.若長時(shí)間不用該色譜柱，要沖洗好后，用純甲醇或乙腈封存?！　∪z測(cè)器是液相色譜的大腦，起著至關(guān)重要的作用。如何更好地發(fā)現(xiàn)和排除檢測(cè)器故障是液相色譜使用的**技能。　　1、檢測(cè)器是液相色譜儀器的數(shù)據(jù)收集部分，由很多的電子和光學(xué)元件組成。禁止拆卸更動(dòng)儀器內(nèi)部元件防止損壞或影響準(zhǔn)確度?！　?、儀器內(nèi)部的流通池是流動(dòng)相流過的元件，樣品的干凈程度和微生物的生長都可能污染流通池，導(dǎo)致無法檢測(cè)或檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)，所以在使用了一段時(shí)間以后要先用水沖洗流通池和管路再換有機(jī)溶劑沖洗?！　?、當(dāng)儀器檢測(cè)數(shù)據(jù)出現(xiàn)明顯波動(dòng)，基線噪音變大時(shí)要沖洗儀器管路，沖洗后如果還是沒有改善就應(yīng)該檢測(cè)氘燈能量，如果能量不足就因更換新的氘燈?！　?、儀器在每次使用完了以后都要用水和**濃度的有機(jī)溶劑沖洗管路，保證下次使用時(shí)管路和系統(tǒng)的清潔。 液相色譜儀“堵”的三大原因 　　液相色譜儀***常見的故障一是堵，二是漏。下面我們來談一下“堵”的情況

　　“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，***主要原因就是流動(dòng)相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是**。

　　“堵”的原因之一：配制流動(dòng)相時(shí)**污染

　　首先，我們要認(rèn)識(shí)到，一般的國產(chǎn)甲醇其實(shí)不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微粒雜質(zhì)，也能在液相流路系統(tǒng)***前端的過濾頭上排除，真正容易引起問題的，是水中的**。

　　新制備的純水在室內(nèi)放置幾天就會(huì)長菌，而這些**雖然肉眼不可見，卻足以堵塞柱填料顆粒的空隙，造成柱子很快報(bào)廢。這就是在配制流動(dòng)相時(shí)造成的**污染的原因，解決它的方法很簡(jiǎn)單，就是確保水的可靠性。這里有兩種方式推薦：

　?。?）***理想的方式當(dāng)然是購買實(shí)驗(yàn)室專用純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。**的缺點(diǎn)就是價(jià)格不菲。

　　（2）成箱購買市售品牌純凈水，如，500mL一支的怡寶或娃哈哈，這些水的質(zhì)量足以應(yīng)付液相色譜的要求。先隨機(jī)抽取一支做一下**平板實(shí)驗(yàn)，待菌落數(shù)合格方可使用。這樣每次只要單獨(dú)開一支即可，也很方便。每次成本2元左右。

　　※這里特別指出一個(gè)細(xì)節(jié)：在絕大多數(shù)書本上，凡談到配制流動(dòng)相都會(huì)談到***后有一個(gè)過濾的步驟。但是從我們長期使用的實(shí)際效果來說，只要能保證水的質(zhì)量，這一步**可以也應(yīng)當(dāng)去除。

　　原因有以下三點(diǎn)：

　?。?）流動(dòng)相過濾在理論上有好處，但是，實(shí)際操作時(shí)由于不可能做到專瓶專用，反而容易造成的交叉污染，對(duì)于配比復(fù)雜的流動(dòng)相影響更大。

　?。?）流動(dòng)相過濾在經(jīng)濟(jì)成本上不劃算。買一套過濾裝置要6000多元，且過濾器公認(rèn)是比較容易損壞的設(shè)備。***主要是過濾片的成本太高，一片就要幾十元。按一般液相柱的正常使用壽命計(jì)算，過濾片的成本會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于色譜柱的成本。

　?。?）流動(dòng)相過濾對(duì)于工作效率成本不劃算。使用溶劑過濾器有一個(gè)預(yù)清洗、裝備、使用、用后清洗，晾干的過程，至少也有一個(gè)小時(shí)的時(shí)間。這個(gè)成本也不能忽視。

　?。?）在實(shí)際工作未發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相不過濾會(huì)對(duì)柱壽命有**影響。我們起碼有6年時(shí)間沒有做過流動(dòng)相過濾的工作，但是和**同行相比較，在同等使用強(qiáng)度下我們的柱壽命是比較長的。

　　“堵”的原因之二：使用流動(dòng)相時(shí)的**污染。

　　指的是：

　　流動(dòng)相剛開始沒有長菌，在使用時(shí)卻產(chǎn)生了**污染。這主要是在使用多元液相色譜儀時(shí)的一種不良使用習(xí)慣造成的。

　　舉***簡(jiǎn)單的例子：

　　50％的甲醇水流動(dòng)相，有兩種使用方式。一種方式是在上機(jī)前就配好混合在一起，另一種方式是在流路A放純甲醇，流路B放純水。

　　從單純實(shí)驗(yàn)效果來說，后一種有明顯的優(yōu)點(diǎn)：首先是簡(jiǎn)單，不需要實(shí)驗(yàn)者另個(gè)計(jì)算配比混合，其次就是比例準(zhǔn)確，能得到保留時(shí)間重復(fù)性**的實(shí)驗(yàn)效果。

　　但是，它有一個(gè)致命的缺陷，就是純水在流動(dòng)相瓶中幾天時(shí)間就會(huì)長**（很多情況下不僅僅用純水作流動(dòng)相，而是用緩沖鹽溶液，本身就是優(yōu)質(zhì)肥料，**長得更迅速），一旦有**柱子就壞得很快。所以這種方式要求操作人員每次實(shí)驗(yàn)都要用新制備的純水，更要求在每次實(shí)驗(yàn)后把水相換掉，換成甲醇沖洗干凈，這一點(diǎn)在實(shí)際工作中很多人意識(shí)不強(qiáng)，就是意識(shí)到了但多次使用中總有一兩次會(huì)遺漏，但是往往這一兩次就足以產(chǎn)生致命的影響。因?yàn)橐合嗌V柱的堵塞是不可逆的。

　　所以，寧可犧牲小小的保留時(shí)間的重復(fù)性，也不要用純水溶液作為流動(dòng)相的一組。從實(shí)際實(shí)驗(yàn)效果來說，我建議用10％的甲醇水代替純水溶液（以前我做過不同比例甲醇水的**總數(shù)實(shí)驗(yàn)，在5％就基本可以**，在10％及以上就可以****了），這樣可以有效排除長**的隱患，既可作流動(dòng)相，也可沖柱。就算是在配制流動(dòng)相時(shí)會(huì)計(jì)算得麻煩一些，但是一次麻煩，終身受益。

　　“堵”的原因之三：不適當(dāng)操作。

　　常見問題的有以下幾種：

　?。?）在更換零件時(shí)選擇的型號(hào)有誤，接口不是很匹配，在擰緊的時(shí)候產(chǎn)生變形而使得管路堵塞。

　?。?）樣品處理液凈化得不干凈，長期會(huì)在六通閥和柱之間形成阻塞不暢。

　?。?）在使用手動(dòng)六通閥時(shí)，有些人可能由于手勁小的原因，轉(zhuǎn)動(dòng)的不到位，于是造成流路形成了死堵，壓力快速升高超過警戒值。

　　（4）在使用金屬管路作出廢液管時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意***好廢液瓶中先放一些水，并把廢液管的出口端放在液面下。如果位于在液相上且實(shí)驗(yàn)使用較高濃度的緩沖鹽溶液，在停機(jī)時(shí)可能在出口端結(jié)晶成塊并造成堵塞。這種情況不常見，但卻的確發(fā)生過。

　　“堵”的原因講了不少，現(xiàn)介紹查堵的方法。

　　在發(fā)生“堵”的現(xiàn)象后，就需要找出原因，主要是什么位置發(fā)生了“堵”。注意，絕大多數(shù)情況下，整個(gè)系統(tǒng)只會(huì)有一個(gè)地方發(fā)生堵塞。

　　查堵的方法是從尾向前逆向分段拆開，仔細(xì)觀察壓力數(shù)值，如果某一個(gè)部件（柱子除外）裝上和拆下時(shí)的壓力差別很大，可發(fā)展變化判斷。至于柱的堵塞，可以通過換同樣規(guī)格的柱的壓力是否一致來判斷。