Agilent液相色譜儀標準操作程序　　1.目的：建立一個液相色譜的標準操作程序。　　2.范圍：適用于Agilent液相的使用?！　?.責任：使用Agilent液相的化驗員?！　?.程序　　4.1工作環(huán)境　　實驗室溫度為20～27℃，溫度變化<3℃/hr，相對濕度<80%，液相色譜儀工作臺，長2米、寬0.8米、承重大于80公斤，離墻距離0.3米以上。單相交流220V，(+5%～10%)，50～60Hz，有單獨的良好接地。配置穩(wěn)壓電源，功率大于2.5千瓦?！　?.2使用前的準備　　4.2.1二次蒸餾水，(建議用0.45微米水相濾膜過濾)；甲醇或乙晴(色譜純)，(建議用0.45微米有機相濾膜過濾)；其他樣品所需流動相，(都需經(jīng)過0.45微米濾膜過濾)。將上述溶劑放入超聲波池，除去氣泡，方可使用?！　?.2.2把流動相放入溶劑瓶中，打開purge閥，單擊pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup選項，進入pump編輯畫面，設(shè)flow：5ml/min，單擊OK；單擊pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊pump control選項，選中ON，單擊OK，則系統(tǒng)開始purge，直到管線內(nèi)(由溶劑瓶到泵入口)無氣泡為止，切換通道繼續(xù)purge，直到所有要用通道無氣泡為止；單擊pump圖標，出現(xiàn)參數(shù)設(shè)定菜單，單擊setup選項，進入pump編輯畫面，設(shè)flow：1.0ml/min，關(guān)閉purge valve。單擊pump下的的瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，也可輸入阻止分析和關(guān)泵的體積，單擊OK?！　?.2.3進行樣品前處理(稀釋或溶解至所需濃度)?！　?.3實驗步驟　　4.3.1準備　　4.3.1.1開啟Agilent 1100LC各模塊電源?！　?.3.1.2打開計算機，雙擊online圖標。　　4.3.1.3從"view"菜單中選擇"method and run control"畫面，單擊"view"菜單中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"標志?！　?.3.2數(shù)據(jù)采集方法編輯　　4.3.2.1從“method"菜單中選擇"edit entire method"項，選中除"data analysis"外的三項，單擊OK，進入下一畫面。　　4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息(如This is for test!)，單擊OK進入下一畫面。　　4.3.2.3泵參數(shù)設(shè)定　　在"flow"處輸入流量1ml/min，在"solvent"處輸入流動相中各溶劑所占的比例，也可"insert"一行"timetable",編輯梯度。在"pressure limits max"處輸入柱子的zui大耐高壓，以保護柱子，單擊OK進入下一畫面?！　?.3.2.4柱溫箱參數(shù)設(shè)定　　在"temperature"下面的方框內(nèi)輸入所需的溫度，并選中它點擊"more>>"鍵，如圖所示，選中"same as left"使柱溫箱的溫度左右一致，點擊OK進入下一畫面?！　?.3.2.5 VWD檢測器參數(shù)設(shè)定　　在"wavelength"下方的空白處輸入所需的檢測波長，在"peak width(response time)"下方點擊下拉式三角框，選擇合適的響應(yīng)時間，如>0.1min 。 在"timetable"中可以"insert"一行，可以輸入隨時間切換的波長?！　?.3.2.6在"run time checklist"中，選中"data acquisition"，單擊OK?！　?.3.2.7單擊“method"菜單，選中"save method as"，輸入一方法名，單擊OK?！　?.3.2.8從"run control"菜單中選擇"sample info"選項，輸入操作者姓名，在"data file"中選擇"manual"或"prefix"?！　?.3.2.9從"instrument"菜單中，選擇"system on"?！　?.3.2.10單擊OK，等儀器ready，基線平穩(wěn)，從"method"菜單中選擇"run method"，進樣?！　?.3.2.11進樣時，閥門位置處于"inject"位置，進樣針取樣量應(yīng)為所規(guī)定體積的三倍，用濾紙拭凈針頭表面殘留液，進樣時要輕而快，進樣完畢應(yīng)快速將閥門搬至"load"位置，進樣完畢，數(shù)分鐘后將進樣針拔下，閥門回復(fù)到"inject"位置。 4.3.3數(shù)據(jù)分析方法編輯　　4.3.3.1從"view"菜單中，單擊"data analysis"進入數(shù)據(jù)分析畫面?！　?.3.3.2從"file"菜單中選擇"load signal"選項，選中您的數(shù)據(jù)文件，單擊OK。　　4.3.3.3做譜圖優(yōu)化，從"graphics"菜單中選擇"signal options"選項，從"ranges"中選擇"auto scale"及合適的顯示時間，單擊OK，或選擇"use ranges"調(diào)整。反復(fù)進行，直到圖的比例合適為止?！　?.3.3.4積分　　4.3.3.4.1從"integration"中選擇"auto integrate"，如積分結(jié)果不理想，再從菜單中選擇"integration events"選項，選擇合適的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。　　4.3.3.4.2從"integration"菜單中選擇"integrate"選項，則數(shù)據(jù)被積分。　　4.3.3.4.3如積分結(jié)果不理想，則重復(fù)上兩步動作，直到滿意為止。　　4.3.3.4.4單擊左邊"√"圖標，將積分參數(shù)存入方法?！　?.3.3.5打印報告　　4.3.3.5.1從"report"菜單中選擇"specify report"選項，進入。　　4.3.3.5.2單擊"quantitative results"框中"calculate"右側(cè)的黑三角，選擇所需的報告形式，其他選項不變，單擊OK。　　4.3.3.5.3從"report"菜單中選擇"print report"，則報告結(jié)果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則單擊"report"底部的"print"鈕?！　?.3.4關(guān)機　　4.3.4.1關(guān)機前，先用水和有機溶劑對系統(tǒng)進行梯度沖洗，然后再用有機溶劑沖洗系統(tǒng)，然后關(guān)泵(適用于反相色譜柱)。[正相色譜柱用適當?shù)娜軇_洗]　　4.3.4.2退出化學(xué)工作站，及其他窗口?！　?.3.4.3關(guān)掉Agilent1100電源開關(guān)，計算機(用shut down關(guān))?！　?.4.1色譜柱長時間不用，存放時，柱內(nèi)應(yīng)充滿溶劑，兩端封死?！　?.4.2對于手動進樣器，當使用緩沖液時，要用水沖洗進樣口，同時搬動進樣閥數(shù)次。　　4.4.3流動相使用前必須過濾、超聲，不能使用多日存放的純化水(易長菌)，應(yīng)每天更換純化水。 液相色譜儀對周圍的環(huán)境的要求 　　液相色譜儀和大多數(shù)分析儀器一樣，對儀器周圍的環(huán)境有**的要求，但沒有太特殊的的要求，滿足一般分析儀器室的基本條件，就能保證儀器的穩(wěn)定運行和**操作。

　?。?）照明：

　　室內(nèi)照明要光線適中，避免陽光直射。為避開直射光線對儀器操作、觀測的影響，儀器(顯示屏)應(yīng)側(cè)向光線。實驗室窗戶要掛窗簾，以便隨時調(diào)節(jié)光照強度。

　　（2）通風(fēng)：

　　使用液相色譜儀分析過程中，由于流動相中含有揮發(fā)性有機溶劑（甲醇、乙睛等）會產(chǎn)生有害氣體，對儀器中的光學(xué)元件帶來腐蝕，應(yīng)注意儀器室的通風(fēng)，以排除室內(nèi)有害氣體、保持空氣清新。

　　通風(fēng)主要有兩種方式:一種自然通風(fēng)，定時打開門窗，讓內(nèi)外空氣對流;另一種是強制通風(fēng)，如用通風(fēng)柜、排風(fēng)扇等，及時將有害氣體排出室外。

　?。?）環(huán)境溫度和濕度：

　　適宜的溫度和濕度是保障HPLC儀正常運行、性能穩(wěn)定的必要條件。

　　HPLC儀一般要求室溫在20一30℃之間，日溫度變化2一3℃，不要波動太大，否則，在開機分析時會影響色譜分離;

　　夏季**要控制室溫不要超過30℃，溫度太高會使流路系統(tǒng)產(chǎn)生氣泡，影響檢測器的正常工作（如熒光檢測器）。室內(nèi)相對濕度應(yīng)控制在60%以下。

　　（4）供電：

　　液相色譜室應(yīng)設(shè)有照明電源和動力電源，動力電可供儀器運行使用。為減少噪音的干擾，儀器應(yīng)遠離瞬時供電的大功率電器設(shè)備，如:大型電動設(shè)備（**溫冰箱、電烤箱等）、電梯、空調(diào)系統(tǒng)等。為保證HPLC輸液泵的精度，必須要保證穩(wěn)定的輸人電壓，為此，建議色譜室應(yīng)設(shè)有和儀器負荷相當?shù)姆€(wěn)壓電源。室內(nèi)墻上應(yīng)安裝有接地電阻符合要求的地線，用于儀器設(shè)備保護性接地的公用地線接地電阻≤4Ω。

　?。?）潔凈度：

　　懸浮于空氣中的顆粒物質(zhì)會對色譜儀器分析帶來干擾，使本底和噪聲升高，成為分析測試的污染源，直接影響高純物質(zhì)的純度與痕量雜質(zhì)的分析。