【***** 使用手冊】色譜是一種分離分析手段，分離是核心，所以擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相以及色譜柱的制備、操作條件。那么，關(guān)于色譜柱的常識你知道多少呢？又應(yīng)該如何選擇合適的色譜柱？下面就來科普一些色譜柱的小知識。　　一、柱子可以分為：加壓，常壓，減壓　　壓力可以增加淋洗劑的流動速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率高的，但是時(shí)間也長，比如，天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的?！　p壓柱能夠減少硅膠的使用量， 感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是，由于大量的空氣通過硅膠會使溶劑揮發(fā)(有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié))，以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣(很大的噪音，而且時(shí)間長)。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動過減壓的念頭了?！　〖訅褐且环N比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵(給魚缸供氣的就行)。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會減低分離效果。個(gè)人覺得加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的?！　《?、關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是又粗又長的好　　柱子長了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就小(反映在柱子上就是樣品層比較薄)，這樣相對的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有 0.5 厘米，那么各組分就比較容易得到**分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對于產(chǎn)品來說也許就不算什么了(有些不環(huán)保的說，不過溶劑回收重蒸后也就減小了部分浪費(fèi))?！　‖F(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在 1：5~10，書中寫硅膠量是樣品量的 30～40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(是指在所需組分 rf 在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1 以上)，就可以少用硅膠，用小柱子(例如，200 毫克的樣品，用50px×500px的柱子);如果，相差不到 0.1，就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑，比如，用 75px 的，也可以減小淋洗劑的極性等等關(guān)于無水無氧柱，適用于對氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品?！　】梢詽裰?，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)?，溶劑和硅膠飽和時(shí)放出的熱量有可能是產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。也是因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶**要用可密封的，遵循 schlenk 操作?！　∪?、關(guān)于濕法、干法上樣　　濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等。。。但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會析出，這一般都是比較大量的樣品才會出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動會溶解的。　　有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱(比如，DMF，DMSO 等，會隨著溶劑一起走，顯色是一個(gè)很長的脫尾)，這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是 1：1，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒(那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上)?！　∷摹⑷軇┑倪x擇　　當(dāng)然是便宜，**，環(huán)保的了，所以，大多選用石油醚，乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別需要不要用不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過，因?yàn)闃O性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是，就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了?！　《燃淄橐灿杏玫?，但是，要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程，所以，夏天的時(shí)候經(jīng)常會在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以，產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比如，重結(jié)晶等。其他溶劑用的相對較少，要依個(gè)人的不同需要選擇?！　∮捎谀承┰?，用到的淋洗劑多是大包裝的(便宜嘛)，我們這里是用 10 升或 25 升的塑料桶裝的， 就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。 經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì)，其他的雜質(zhì)就可想而知了， 所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對溶劑重蒸。 當(dāng)然，過原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法?！　×硗猓軇┰谶^柱子后好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗**的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會導(dǎo)性的變化，一般會使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑后回收要采用常壓，因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來， 常壓時(shí)就會減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了?！　∥?、關(guān)于操作問題　　1.裝柱：　　柱子下面的活塞**不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密(太密了淋洗劑走的太慢)，**要均勻(不然樣品就會從一側(cè)斜著下來)。書中寫的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會影響分離效果，甚至作廢!　　2.加樣：　　用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后，再打開活塞，如此，兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離(2～100px 就夠了)，再加壓，這樣避免了溶劑(如，二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。　　3.淋洗劑的選擇：　　感覺上要使所需點(diǎn)在 Rf0.2~0.3 左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性，如果 Rf 在 0.6，即使相差 0.2 也不容易在柱子上分開，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀態(tài)?！　】梢酝ㄟ^公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如(0.2/0.3)的三次方或四次方大?！　?.樣品的收集：　　用硅膠作固定相過柱子的試驗(yàn)方法是一個(gè)吸附與解吸的平衡，所以，如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相?！　×硗猓占脑嚬艽笮∫詷悠妨慷?，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品。嗚嗚，如果都用小試管那工作量又太大?！　?.后的處理：　　柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會累積到產(chǎn)品中，所以，如果想送分析，好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)?，大部分雜質(zhì)溶在溶劑里，一洗基本就沒了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。 正確安裝毛細(xì)管色譜柱的方法

　　1、步驟一：

　　檢查氣體過濾器、載氣、進(jìn)樣墊和襯管等檢查進(jìn)樣墊和氣體過濾器，保證輔助氣和檢測器用氣通暢有效。如果以前做過沸點(diǎn)較高的化合物，需要將進(jìn)樣口襯管清洗或更換。

　　2、步驟二：

　　將螺母和卡套裝在柱上，并將色譜柱兩端口小心切平在色譜柱的一端裝上相應(yīng)的螺母和卡套，此時(shí)色譜柱端口無前后之分，色譜柱支架的支撐部分應(yīng)總是朝向著柱箱門。安裝好螺母和卡套后，將色譜柱端口切平，并用放大鏡進(jìn)行檢查，以確認(rèn)切口和管壁成直角，并且沒有殘留的碎屑，沒有毛邊或不平的切割面。

　　3、步驟三：

　　將色譜柱連于進(jìn)樣口上通常來說，色譜柱的頂端應(yīng)保持在進(jìn)樣口襯管的中下部，當(dāng)進(jìn)樣針穿過隔墊**插入進(jìn)樣口后，如果針尖與襯管中的色譜柱頂端相差1-2cm，這就是較為理想的狀態(tài)。從色譜柱架上取出需要連接的足夠的長度，并按步驟2切割柱子，連接到進(jìn)樣口。避免用力彎曲壓擠毛細(xì)柱，并小心不要讓標(biāo)記牌等有鋒利邊緣的物品與色譜柱接觸磨擦，以防柱身斷裂或受損。將色譜柱正確地嵌入進(jìn)樣口后，用手把連接螺母擰上，用手?jǐn)Q緊后用扳手再擰1/4-1/2圈。

　　4、步驟四：

　　接通載氣載氣必須為高純氮?dú)猓ɑ蚝猓?，純度達(dá)99.999%，使用極性柱時(shí)（如FFAP、PEG-20M等），***好載氣加脫氧管進(jìn)一步脫氧，這樣可延長柱子的使用壽命。當(dāng)色譜柱與進(jìn)樣口連接好后，接通載氣。調(diào)節(jié)柱前壓力以得到合適的載氣流速。將色譜柱的另一端（空端），插入裝有己烷的樣品瓶中，正常情況下，我們可以看見瓶中穩(wěn)定持續(xù)的氣泡。如果沒有氣泡，就要重新檢查一下載氣裝置和流量控制器等是否安裝**或設(shè)置正確，并檢測一下整個(gè)氣路有無泄漏。等所有問題解決后，將色譜柱端口從瓶中取出，擦試干凈，保證柱端口無溶劑殘留，再進(jìn)行下一步安裝。毛細(xì)管柱前壓參考設(shè)置（Mpa）柱長m柱內(nèi)徑（mm）0.250.320.53150.050.040.02300.10.080.03500.180.140.05

　　5、步驟五：

　　將色譜柱連于檢測器上其安裝和所需注意的事項(xiàng)與以上色譜柱與進(jìn)樣口聯(lián)接（步驟3）部分所講述的大致相同。安裝時(shí)要注意色譜柱末端要高于尾吹點(diǎn)，或按照色譜儀說明書安裝。步驟6：進(jìn)**體檢漏在色譜柱加熱前，要對GC系統(tǒng)進(jìn)行檢漏。建議使用1∶1的異丙醇/水的混合溶液進(jìn)行檢查。步驟7：色譜柱的老化色譜柱安裝和系統(tǒng)檢漏工作完成后，就可以對色譜柱進(jìn)行老化了。將色譜柱程序升溫至***高使用溫度的30℃以下，恒溫30分鐘。這樣柱子內(nèi)吸附的組份會被吹出，以免影響您的分析。***后，將色譜柱的溫度降低至所需要的溫度，即可進(jìn)行實(shí)際樣品的分析。