【***** 使用手冊】離子色譜柱使用純水進(jìn)行沖洗是錯(cuò)誤的。因?yàn)樵谝话闱闆r下，如果直接使用純水對離子色譜柱進(jìn)行沖洗，很容易導(dǎo)致離子色譜柱中的固定相流失并且出現(xiàn)相塌陷現(xiàn)象，因此一般情況下并不建議直接使用純水對離子色譜柱進(jìn)行沖洗的。通常我們在對離子色譜柱進(jìn)行沖洗時(shí)，是建議在純水中加入甲醇或乙腈等物質(zhì)，再對離子色譜柱進(jìn)行沖洗，這樣的對離子色譜柱進(jìn)行沖洗一般不會對離子色譜柱造成影響。而離子色譜柱之所以不能直接用純水進(jìn)行沖洗的原因分析有以下幾點(diǎn)：　　1.一般離子色譜柱的材質(zhì)不允許長時(shí)間被純水沖洗。由于現(xiàn)今大部分離子色譜柱以硅膠為基質(zhì)，而硅膠的性質(zhì)卻是其溶解度在純水中會比一般含有有機(jī)溶劑中要大得多，因而使用純水對離子色譜柱進(jìn)行沖洗，會讓離子色譜柱中的硅膠材質(zhì)產(chǎn)生溶解，長時(shí)間的純水沖洗會導(dǎo)致離子色譜柱中的固定相流失，從而降低了離子色譜柱的柱效?！　?.對一般C18柱來說，因?yàn)镃18長鏈本身是溶解在水中的，而且C18長鏈之間的相互作用力是大于C18和水分子之間的作用力的，所以如果長時(shí)間的用純水對離子色譜柱進(jìn)行沖洗，會讓C18長鏈之間相互靠近，并且使得相互聯(lián)結(jié)的C18長鏈在硅膠質(zhì)地的基質(zhì)表面上倒伏，對疏水性物質(zhì)的保留能力會因此下降，即相塌陷。為了給只能溶解在純水中的樣品提供分析條件，有些企業(yè)推出適合做離子色譜柱沖洗的純水柱，這種純水柱不會產(chǎn)生相塌陷，因而可以對只溶解在純水中的樣品進(jìn)行分析了。　　3.如果離子色譜柱中使用過含緩沖鹽的流動相時(shí)，用純水沖洗并不能將緩沖鹽洗去。這是因?yàn)榫彌_鹽本身是難溶于有機(jī)溶劑中的，C18反相柱中用到的填料是在硅膠表面上接上的C18長鏈，這相當(dāng)于一個(gè)疏水的有機(jī)相，并且因?yàn)楣枘z基體被有機(jī)物質(zhì)包裹著，所以在操作時(shí)使用緩沖鹽水溶液做流動相時(shí)緩沖鹽可能不容易到達(dá)硅膠基質(zhì)，不至損害基體。但是使用的流動相一般來說通常會有一些有機(jī)溶劑，而且這些有機(jī)溶劑和C18長鏈?zhǔn)腔ハ嗳芙獾?，因此有機(jī)溶劑的加入增強(qiáng)了流動相滲入硅膠基質(zhì)的能力，能讓一部分的緩沖鹽與硅膠基質(zhì)接觸。所以直接用純水沖洗離子色譜柱只能沖洗其表面的緩沖鹽，但是滲入到離子色譜柱中深處的緩沖鹽仍舊會殘留在那里。所以建議在沖洗離子色譜柱的時(shí)候，在純水中加入一部分有機(jī)溶劑，水和有機(jī)溶劑的比例視情況而定，這樣含有有機(jī)溶劑的水便能對離子色譜柱進(jìn)行沖洗了。 想知道色譜柱的壽命延長方式有哪些？

色譜柱的利用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及利用頻率有關(guān)系外，主要的是與日常的委會密切相關(guān)。為延長色譜柱的利用壽命，維護(hù)您的利益，請仔細(xì)閱讀此部分。 色譜柱的利用壽命主要是分局柱效和柱壓兩個(gè)指標(biāo)來衡量，假設(shè)一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認(rèn)為該色譜柱已經(jīng)結(jié)束。因此，延長色譜柱利用壽命的關(guān)鍵是，**引起柱效下降和柱壓升高的因素。

以下是色譜柱的日常維護(hù)點(diǎn)子：

1.流動相的PH應(yīng)在利用的范圍內(nèi)反相色譜柱由于填料中存在Si-C和Si-O鍵，流動相超過其PH范圍將會導(dǎo)致硅膠基質(zhì)流失和鍵合相碳鏈斷裂，使柱效下降，利用壽命變短。由于流動相的PH 控制欠妥而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對待，嚴(yán)格控制流動相的PH值。

2.去除樣品和流動相中的固體顆粒 樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因?yàn)楹Y板的堵塞會引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議利用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過濾，流動相過0.45μm濾膜。

3.利用維護(hù)柱或在線過濾器 樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能****固體顆粒物質(zhì)，因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。維護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此能夠阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例，因此，除對樣品和流動相進(jìn)行過濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上維護(hù)柱或在線過濾器。 假設(shè)確認(rèn)色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的，可選擇以下方式進(jìn)行補(bǔ)救：

先在色譜柱前加上維護(hù)柱或在線過濾器，然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。

先在色譜柱進(jìn)樣端加上維護(hù)柱或在線過濾器，然后反向利用。

色譜柱參數(shù)

物理性質(zhì)

柱長，內(nèi)徑，如250*4.6mm。一般柱長在2—250mm，柱越長，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時(shí)間更長;但分離度與理論塔板數(shù)的平方根成正比，所以一昧增加柱長并不是***有效的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數(shù)。

粒徑，影響色譜分離度。粒徑越小，分離越快，柱效越高，但柱壓力越高，柱容易被污染，導(dǎo)致柱壽命降低。常見分析柱通常使用5um填料，復(fù)雜的多組分樣品分離一般使用3.5um粒徑，更大內(nèi)徑的制備色譜柱通常使用更大的粒徑。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選用更小的粒度的填料是很有用的。3.5um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%;然而，3.5um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍，因此如何選擇填料粒徑需要根據(jù)現(xiàn)實(shí)情況而定。

孔徑，60A，120A，300A等?？讖叫?，則含孔率高，比表面積大，載碳量高;色譜柱填料孔徑大小需和分子大小相匹配，保證分子自由進(jìn)出填料孔并與孔內(nèi)表面的鍵合相進(jìn)行分離分配，通常要求孔徑直徑是分子直徑的3倍以上，一般小分子使用80—120A，大分子使用300A。

顆粒形狀，一般有球形和不規(guī)則形，當(dāng)使用黏度較大的流動相時(shí)，球形顆粒可以降低柱壓，延長色譜柱壽命。

苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強(qiáng)的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價(jià)格較貴。

載碳量：基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則保留增加，適合分析非極性化合物。

鍵合相：鍵合試劑不同，對化合物的選擇性不同，一般長鏈的烷基鍵合相(C18 C8)比短鏈的(C4 C3)穩(wěn)定;非極性的鍵合相比極性的鍵合相(-NH2)穩(wěn)定。

封端：用短鏈將裸露的硅羥基鍵合后封閉起來，以減少殘留的硅醇基，減輕待測組分與酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象。尤其對于極性樣品而言，未封端處理的色譜柱分離效果較差。

現(xiàn)在商品化的液相色譜柱琳瑯滿目，根據(jù)色譜柱的參數(shù)可以給我們提供一個(gè)初步的選擇，但由于各個(gè)儀器廠商的填料技術(shù)和鍵合技術(shù)都有差異，即使都是C18柱，同一品牌不同系列都有不同的功能，有能耐受低pH值的、有耐高溫的、有適合堿性樣品的等等。所以在選擇色譜柱前要好好研究色譜柱參數(shù)，仔細(xì)閱讀色譜柱說明書，才能找到合適的色譜柱和適宜的分離方法。