【***** 使用手冊】色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。液相色譜通常均采用填充柱。而對于液相色譜而言，色譜填料的選擇有時候恰恰決定了樣品分析效果的好快。今天小編就圍繞常見的色譜填料種類，講解一下，應(yīng)該如何針對儀器使用環(huán)境對色譜填料進行合適的選擇?！　」枘z填料　　硅膠填料主要應(yīng)用正相色譜及反相色譜柱中，正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)，以及其他具有極性官能團，如胺基團(NH2,APS)和氰基團(CN，CPS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基(SiOH)或其他團的極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中的各組份的極性大小，即極性強弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。反相色譜填料常是以硅膠為基礎(chǔ)，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等?！　【酆衔锾盍稀　【酆衔镎{(diào)料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優(yōu)點是在PH值為1～14均可使用。相對與硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低?！　∑渌麩o機填料　　其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì)，一般于特殊的用途。如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強，石墨化碳可用于分離某些幾何導(dǎo)構(gòu)體，又由于HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在**PH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點是可在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應(yīng)用范圍受到**的限制，所以未能廣泛應(yīng)用，新型氧化鋯填料也可用于HPLC，商品化的**聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應(yīng)用PH范圍1～14，溫度可達(dá)100℃。由于氧化鋯填料幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中。 **液相色譜的維護如何？

**液相色譜以它定量分析結(jié)果準(zhǔn)確、分析周期短、分析范圍廣及分析檢測限低等優(yōu)勢，在食品添加劑、**成分分析等多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。

本文就液相色譜儀在實際操作時應(yīng)注意的事項及維護做了簡單介紹。

主要部件介紹

輸液系統(tǒng)

輸液系統(tǒng)主要包括在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡。**液相色譜柱的填料顆粒小，通過2~5mm的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。

高壓泵按輸液性能可分為恒壓、恒流泵。按機械結(jié)構(gòu)可分為：液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往復(fù)柱塞泵。

進樣器

進樣器是將分析樣品送入色譜柱的裝置，分為手動、自動進樣器兩種。手動進樣器一般配有20~100μL的定量環(huán)。

色譜柱

色譜柱以液體為流動相，以廣義的固相為固定相來進行分析樣品的分離工作。

色譜柱按照分離模式大致可以分為正相色譜柱和反相色譜柱。

檢測器

檢測器是將色譜柱分離出樣品的物理或化學(xué)特性轉(zhuǎn)換為可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果，依據(jù)標(biāo)物、分析樣色譜圖的出峰時間、峰面積分別對樣品進行定性定量分析。

維護及使用注意事項

1.開關(guān)機操作注意

分析準(zhǔn)備工作做好后，依次打開穩(wěn)壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器，待各部件自檢結(jié)束，打開連接儀器的電腦，啟動工作軟件。分析工作結(jié)束后，關(guān)閉工作軟件，再依次關(guān)閉檢測器、柱溫箱和高壓輸液泵。

2.對流動相的要求

為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經(jīng)過過濾雜質(zhì)、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。

(1)流動相的物理化學(xué)性能要求

對分析物要有足夠的溶解能力，以利于提高檢驗的靈敏度;流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓;流動相的沸點要低，以利于制備分離時樣品的回收;流動相的PH值一般應(yīng)在2~7.5;使用期限不得超過2天，否則產(chǎn)生**污染管路。

(2)流動相的過濾

流動相在使用前都必須經(jīng)過濾，以除去雜質(zhì)微粒。同時要定期清洗吸濾頭，以防雜質(zhì)通過其進入流動相。應(yīng)依據(jù)其是否是水溶性選擇水膜或有機膜(0.45μm或0.22μm)，使用溶劑過濾裝置，通過真空泵抽氣過濾。

(3)流動相的脫氣

流動相必須預(yù)先脫氣，否則易產(chǎn)生氣泡，影響泵的工作。此外，溶解在流動相中的氧能與某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡(luò)合物，提高背景吸收，會在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。

常有的脫氣方法有在線真空脫氣法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法三種。

3.色譜柱的維護及使用注意事項

所有分析樣品zui好把pH值調(diào)節(jié)到適合色譜柱的pH值范圍內(nèi)。進樣要避免超負(fù)荷，這是保持色譜柱性能**良好的重要方法之一。

手動進樣器進樣的話，進樣時動作要快速準(zhǔn)確。分析物成分復(fù)雜時，要在色譜柱前加色譜保護柱以保護色譜柱。

每次分析工作開始時，要對色譜柱進行平衡，用含10%流動相中的有機溶劑的水溶液進行排氣和沖洗色譜柱和管路，沖洗30分鐘左右，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然后再用至少10倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至基線平衡后方可進樣。

每次分析工作結(jié)束后，**要立即用**量的水溶液**沖洗色譜柱中的緩沖鹽液，再用對被測物洗脫能力強的溶劑來沖洗色譜柱，沖洗時間不能小于1小時，洗脫溶劑的用量至少為柱體積的20倍。

若不及時沖洗色譜柱，雜質(zhì)長時間積累在其中，易堵塞色譜柱，降低柱效性能。

長期這樣，會加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱4天以上不使用，應(yīng)從儀器上取下，用封頭螺帽把兩頭緊緊密封。色譜柱保存時注意不要強烈震動、碰撞。

4.高壓輸液泵的維護及使用注意事項

每次分析工作結(jié)束后，都應(yīng)及時清洗泵。當(dāng)有緩沖鹽做流動相時，緩沖鹽與有機溶劑互相交換前**要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機相中結(jié)晶損壞泵中各組件。

緩沖鹽溶液的濃度不要過高，要控制在5%以下，否則高濃度的緩沖鹽會磨損密封墊和活塞，降低其使用壽命。長時間使用高濃度的緩沖鹽，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵，從而保護柱塞和密封墊。

輸液泵工作前要設(shè)置工作壓力范圍，正常工作壓力一般不要超過30Mpa，否則經(jīng)常高壓會使密封環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。平時分析工作要養(yǎng)成記錄壓力的好習(xí)慣，這樣如果工作壓力超過平時正常壓力的10%~15%，就應(yīng)及時查找原因。

5.紫外檢測器的維護及使用注意事項

紫外檢測器有**的使用壽命，所以平時應(yīng)盡量減少氘燈的使用時間，在柱平衡進行一大半之后，在走基線之前，打開檢測器光源;分析結(jié)束后即可關(guān)閉檢測器光源。

要保持檢測器四周環(huán)境清潔，實驗室盡量少開窗戶，定期地面進行吸塵工作，防止檢測器工作時由于靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學(xué)元件上。

檢測器池內(nèi)存在氣泡就會產(chǎn)生噪音，噪音會干擾定量分析，所以流動相須充分脫氣后再使用。

應(yīng)定期清洗流通池。如觀察到流通池內(nèi)部無氣泡或臟物，應(yīng)清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機溶劑沖洗池內(nèi)，以清洗透鏡。如是含有緩沖鹽的溶劑作流動相，應(yīng)在使用異丙醇沖洗前用水替換池中原先有的溶劑。