【導(dǎo)讀】紫外吸收檢測器 ultraviolet absorption detector 紫外吸收檢測器 ultraviolet absorption detector 簡稱紫外檢測器（UV），是基于溶質(zhì)分

紫外吸收檢測器 ultraviolet absorption detector

紫外吸收檢測器 ultraviolet absorption detector 簡稱紫外檢測器（UV），是基于溶質(zhì)分子吸收紫外光的試驗(yàn)方法設(shè)計(jì)的檢測器。因?yàn)榇蟛糠殖Ｒ娪袡C(jī)物質(zhì)和部分無機(jī)物質(zhì)都具有紫外吸收性質(zhì)，所以該檢測器是液相色譜中應(yīng)用***廣泛的檢測器，幾乎所有液相色譜儀都配置了這種檢測器。它不**較好的選擇性和較高的靈敏度，而且對環(huán)境溫度、流動(dòng)相組成變化和流速波動(dòng)不太敏感，因此既可用于等度洗脫，也可用于梯度洗脫。其檢測靈敏度在mg/L至mg/L范圍。 可見光檢測器 visible light detector 可見光檢測器 visible light detector 又稱分光光度檢測器，是基于溶質(zhì)分子吸收可見光的試驗(yàn)方法設(shè)計(jì)的檢測器。能夠直接采用可見光檢測的溶質(zhì)不是很多，而且多數(shù)靈敏度也不高，但采用具有高摩爾吸光系數(shù)的有機(jī)試劑（配位體和螯合劑）作為衍生化試劑進(jìn)行柱前或柱后衍生操作的衍生化光度檢測法是相當(dāng)有用的，特別是在金屬離子配合物液相色譜中的應(yīng)用是相當(dāng)成功的。 低壓梯度 low-pressure gradient 低壓梯度 low-pressure gradient 又稱外梯度，是在低壓狀態(tài)下完成流動(dòng)相強(qiáng)度調(diào)整的梯度裝置。只需一個(gè)高壓泵，與等度洗脫輸液系統(tǒng)相比，就是在泵前安裝了一個(gè)比例閥，混合就在比例閥中完成。因?yàn)楸壤y是在泵之前，所以是在常壓（低壓）下混合之后再增壓輸送到色譜柱的。 蒸發(fā)光散射檢測器克服常見的HPLC檢測難題 雖然陣法光散射檢測器(Evaportive light Scattering,ELSD)已經(jīng)開發(fā)生產(chǎn)15年，但是對于許多色譜工作者來說，它仍是一個(gè)新產(chǎn)品。**臺(tái)ELSD是由澳大利亞的Union Carbide研究實(shí)驗(yàn)室的科學(xué)家研制開發(fā)的，并在八十年代初轉(zhuǎn)化為商品，八十年代以激光為光源的第二代ELSD面世。此后，通過不斷設(shè)計(jì)提高了ELSD的操作性能。現(xiàn)在ELSD越來越多的作為通用型檢測器]用于**液相色譜，超臨界色譜（SFC）和逆流色譜中。ELSD**的優(yōu)越性在于能檢測不含發(fā)色團(tuán)的化合物，如：碳水化合物、脂類、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸、表面活性劑、**，并在沒有標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)未知的情況下檢測未知化合物 。 ELSD的通用檢測方法**了常見于傳統(tǒng)HPLC檢測方法中的難點(diǎn)，不同于紫外和熒光檢測器，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，**揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品均能被檢測，不受其官能團(tuán)的影響。ELSD 的響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比，因而能用于測定樣品的純度或者檢測未知物。示差檢測器（RI）也可以說是一種通用型檢測器，打它靈敏度低，并與梯度脫洗不相容。質(zhì)譜是另一種通用型檢測器，但它的昂貴操作費(fèi)用和復(fù)雜性限制了它的應(yīng)用。 ELSD的獨(dú)特檢測方法，對于它的多種用途和高性能至為關(guān)鍵。ELSD檢測只要分為三個(gè)步驟：（1）用惰性氣體霧化脫洗液（2）流動(dòng)相在加熱管（漂移管）中蒸發(fā)（3）樣品顆粒散射光后得到檢測。 討論: UV檢測的主要缺點(diǎn)在于紫外不吸收的化合物靈敏度很低。ELSD可以檢測**揮發(fā)性低于流動(dòng)相的樣品。ELSD的通用性響應(yīng)值使得ELSD響應(yīng)值比UV響應(yīng)值更能代表樣品的質(zhì)量 不同于紫外檢測只能使用不吸收紫外的流動(dòng)相，ELSD能與**的揮發(fā)性流動(dòng)相相容，不論其光學(xué)特性。您可根據(jù)樣品的溶解度或分離特性選擇流動(dòng)相，例如選擇氯仿和丙酮用于脂類的分離以提高樣品的溶解性。用紫外檢測器定量未知物是困難的，因?yàn)闃悠返淖贤馕罩低痛順悠返馁|(zhì)量的色譜峰的大小無關(guān)。ELSD對幾乎所有的樣品給出一致的響應(yīng)因子。因此可以通過和內(nèi)標(biāo)比較定量未知化合物，此特性對于使用組合化合技術(shù)而合成的系列化合物的定量尤其有用。用組合合成技術(shù)合成的化合物通常是用HPLC聯(lián)合低波長紫外或質(zhì)譜檢測進(jìn)行分析，但是，在缺乏已表面活性劑非常靈敏，并在梯度脫洗下維知結(jié)構(gòu)參數(shù)已知的參照標(biāo)準(zhǔn)品情況下，兩種方法都不能準(zhǔn)確的定量分析此種系列化合物。 熒光檢測 熒光檢測的主要缺點(diǎn)在于只有少數(shù)化合物產(chǎn)生熒光。大多數(shù)的分子不發(fā)熒光，但含有可衍生的官能團(tuán)用于合成能發(fā)熒光的衍生物，例如，鄰苯二甲醛是一種常用熒光基團(tuán)用于柱后衍生氨基酸。雖然熒光檢測很靈敏，但對于常見的樣品分析來說不需要如此高的靈敏度。因?yàn)镋LSD的響應(yīng)不依賴于熒光基團(tuán)，所以不需要衍生，因此大大降低了樣品預(yù)處理和分析時(shí)間。 示差檢測： 雖然示差檢測在試驗(yàn)方法上是通用型檢測器，但是它的靈敏度低，和梯度脫洗不相容，因此它對于HPLC來說不是理想的檢測器。室溫的變化會(huì)影響基線的穩(wěn)定性，大的溶劑前沿峰可能會(huì)掩蓋前期脫洗的色譜峰。因?yàn)镋LSD在檢測前將流動(dòng)相蒸發(fā)，所以基線的噪聲和漂移都很小，因此基線穩(wěn)定和樣品檢測的靈敏度高。流動(dòng)相的蒸發(fā)使得ELSD和梯度脫洗相容，因而可提高色譜分離的分辨率和縮短分離時(shí)間。另外ELSD比RI檢測蔗糖靈敏度高和基線穩(wěn)定。 應(yīng)用實(shí)例： 近年來，脂類在生物學(xué)和經(jīng)濟(jì)領(lǐng)域中的重要性正在日益引起廣泛的關(guān)注。脂類的分析方法對于許多研究工作，臨床使用和質(zhì)量控制方面都非常重要。大多數(shù)的脂類分子都缺乏適當(dāng)?shù)陌l(fā)色團(tuán)，因此脂類除非通過衍生化，否則不能用紫外檢測。一般但一樣品種含有的各種脂類其極性差異很大，弱項(xiàng)要達(dá)到個(gè)作分的***佳分離和分辨率需要使用梯度脫洗，因而限制了示差檢測器的使用。不同于UV和RI的局限性，ELSD是脂類檢測的有用工具。 碳水化合物不帶有發(fā)色團(tuán)，因而不能用UV來檢測。他們通常用氨基柱或者陽離子交換樹脂分離。但是示差檢測器不是很靈敏，而且需要控制溫度來維持基線穩(wěn)定，不能與梯度脫洗相容。ELSD靈敏度高，基線穩(wěn)定，與梯度脫洗相容。 隨著高聚物和表面活性劑在許多行業(yè)中的廣泛應(yīng)用，簡單和可靠的分析方法的尤為重要，他們通常是不含有發(fā)色團(tuán)的復(fù)合分子。此類化合物不帶有適當(dāng)?shù)陌l(fā)色團(tuán)和分離是需要采用梯度脫洗意味著不能采用示差和紫外檢測器。ELSD檢測高聚物和表面活性劑可以保持基線穩(wěn)定。 在科研、臨床和生產(chǎn)的工藝控制上，**需要分析評(píng)估。目前，隨著日益增長的加速藥品開發(fā)的要求，藥品工作者需要一種開速的鑒定方法來測定帶物的代謝物、雜質(zhì)、降解物和各種天然產(chǎn)物，許多不含有適當(dāng)?shù)陌l(fā)色團(tuán)，限制了紫外檢測器的使用。示差比紫外檢測器的靈敏度要低，且不能與梯度脫洗相容，而復(fù)雜的藥品分析常需要梯度脫洗。ELSD的通用檢測能力和梯度相容性使得ELSD是**分析的理想工具。因?yàn)镋LSD的響應(yīng)接近于代表產(chǎn)品的質(zhì)量，所以即使在降解產(chǎn)物和雜質(zhì)的性質(zhì)不明確的情況下ELSD的使用為**雜質(zhì)分析提供***快速的方法。 結(jié)論： 蒸發(fā)光散射檢測器正日益成為分析碳?xì)浠衔铩⒈砻婊钚詣?、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油、和其他難檢樣品的強(qiáng)大工具，多用途的ELSD能檢測**揮發(fā)相低于流動(dòng)相的樣品，克服了常見于示差和紫外檢測器的缺點(diǎn)。 紫外-可見光（UV-VIS）檢測器 　　試驗(yàn)方法： 基于Lambert-Beer定律，即被測組分對紫外光或可見光具有吸收，且吸收強(qiáng)度與組分濃度成正比。 很多有機(jī)分子都具紫外或可見光吸收基團(tuán)，有較強(qiáng)的紫外或可見光吸收能力，因此UV-VIS檢測器既有較高的靈敏度，也有很廣泛的應(yīng)用范圍。由于UV-VIS對環(huán)境溫度、流速、流動(dòng)相組成等的變化不是很敏感，所以還能用于梯度淋洗。一般的液相色譜儀都配置有UV-VIS檢測器。 用UV-VIS檢測時(shí)，為了得到高的靈敏度，常選擇被測物質(zhì)能產(chǎn)生**吸收的波長作檢測波長，但為了選擇性或其它目的也可適當(dāng)犧牲靈敏度而選擇吸收稍弱的波長，另外，應(yīng)盡可能選擇在檢測波長下沒有背景吸收的流動(dòng)相。 　　二極管陣列檢測器（diode-array detector, DAD）： 以光電二極管陣列（或CCD陣列，硅靶攝像管等）作為檢測元件的UV-VIS檢測器（圖8-15）。它可構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí)檢測由光柵分光，再入射到陣列式接受器上的**波長的信號(hào)，然后，對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到的是時(shí)間、光強(qiáng)度和波長的三維譜圖。與普通UV-VIS檢測器不同的是，普通UV-VIS檢測器是先用單色器分光，只讓特定波長的光進(jìn)入流動(dòng)池。而二極管陣列UV-VIS檢測器是先讓所有波長的光都通過流動(dòng)池，然后通過一系列分光技術(shù)，使所有波長的光在接受器上被檢 直接紫外檢測： 所使用的流動(dòng)相為在檢測波長下無紫外吸收的溶劑，檢測器直接測定被測組分的紫外吸收強(qiáng)度。多數(shù)情況下采用直接紫外檢測。 　　間接紫外檢測： 使用具有紫外吸收的溶液作流動(dòng)相，間接檢測無紫外吸收的組分。在離子色譜中使用較多，如以具有紫外吸收的鄰苯二甲酸氫鉀溶液作陰離子分離的流動(dòng)相，當(dāng)無紫外吸收的無機(jī)陰離子被洗脫到流動(dòng)相中時(shí)，會(huì)使流動(dòng)相的紫外吸收減小。 　　柱后衍生化光度檢測： 對于那些可以與顯色劑反應(yīng)生成有色配合物的組分（過渡金屬離子、氨基酸等），可以在組分從色譜柱中洗脫出來之后與合適的顯色劑反應(yīng)，在可見光區(qū)檢測生成的有色配合物

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等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,**液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓**器,集菌儀,接地電阻測試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場強(qiáng)儀**材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。

色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等，色譜柱效受柱內(nèi)外因素影響，為使色譜柱達(dá)到***佳效率，除柱外死體積要小外，還要有合理的柱結(jié)構(gòu)及裝填技術(shù)。1、**液相色譜柱的保養(yǎng)色譜柱在使用前，***好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行（出廠測試所使用的條件是***佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進(jìn)行測試以后，我們要根據(jù)不同的情況對色譜柱進(jìn)行保養(yǎng)：①反相色譜柱每天實(shí)驗(yàn)后的保養(yǎng)：使用緩沖液或含鹽的流動(dòng)相，實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應(yīng)該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長期保存色譜柱：如色譜柱要長時(shí)間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲(chǔ)存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲(chǔ)存于嚴(yán)格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲(chǔ)存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時(shí)附送的堵頭堵上。儲(chǔ)存的溫度***好是室溫.2、**液相色譜柱的維護(hù)我們在使用新的色譜柱應(yīng)該在我們自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應(yīng)時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現(xiàn)象，造成這種現(xiàn)象的主要原因是①溶劑中的不溶物；②樣品中的不溶物；③泵進(jìn)樣器等中的不溶物；④柱內(nèi)不溶物的形成等。如果當(dāng)色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進(jìn)行修復(fù)，首先，使用含鹽緩沖液后（如離子對試劑）應(yīng)用溶解性強(qiáng)的溶劑（如水）進(jìn)行沖洗。其次，先斷開檢測器，然后用對來自樣品中的物質(zhì)有強(qiáng)溶解性的溶劑進(jìn)行沖洗，對于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應(yīng)避免溶劑的pH低于2或高于8。***后如果經(jīng)過上述還是沒有修復(fù)，色譜柱壓力還是沒有下降，則要斷開檢測器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩(wěn)定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5ml/min流速?zèng)_洗一小時(shí)。如果壓力不下降，則要看內(nèi)置過濾器是否被堵塞，如果被堵塞應(yīng)沖洗或更換，若進(jìn)口端的填料發(fā)生堵塞，柱子將不可能被**恢復(fù)，只能通過去掉進(jìn)口端的部分填料，重新填充進(jìn)行有限的柱效恢復(fù)。而且修復(fù)的厚度是2-5mm 通過本文希望大家對**液相色譜柱的保養(yǎng)和維護(hù)方法有所了解。

液相色譜儀基線不穩(wěn)原因有哪些?

1、流動(dòng)相中可能有溶解氣體。 用超聲脫氣15～30分鐘或用大氣脫氣。

2、系統(tǒng)中可能有漏液處。檢查病確定漏液的位置并排除。

3、泵的密封可能損壞，使泵壓不穩(wěn)。更換泵的密封。

4、柱子平衡膠慢，特別是更換流動(dòng)相時(shí)。用中等強(qiáng)度的溶劑沖洗柱子。一般更換流動(dòng)相時(shí)，先用10到20倍體積的新流動(dòng)相沖洗。

5、單向閥可能堵塞。取下單向閥，用超聲在10%甲醇水中清洗30分鐘。

6、檢測器沒有設(shè)定在**吸收波長處。

7、柱子中有氣泡。

8、泵中有氣泡