?一、凝膠成像系統(tǒng)的試驗方法?
樣品在電泳凝膠或者其他載體上的遷移率不一樣,以標準品或者其他的替代標準品相比較就會對未知樣品作一個定性分析。這個就是圖像分析系統(tǒng)定性的基礎。根據未知樣品在圖譜中的位置可以對其作定性分析,就可以確定它的成份和性質。
樣品對投射或者反射光有部分的吸收,從而照相所得到的圖像上面的樣品條帶的光密度就會有差異。光密度于樣品的濃度或者質量成線性關系。根據未知樣品的光密度,通過于已知濃度的樣品條帶的光密度指相比較就可以得到未知樣品的濃度或者質量。這就是圖像分析系統(tǒng)定量的基礎。采用***新技術的紫外透射光源和白光透射光源使光的分布更加均勻,**限度的**了光密度不均造成的對結果的影響。
二、凝膠成像的適用范圍?
1.蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。
2.可以確定生物分子的分子量。
3.可以應用于生物分子的定量分析中。
三、凝膠成像一般操作步驟?
1.打開凝膠成像系統(tǒng)開關。
2.打開電腦,系統(tǒng)自動打開并進入成像軟件。
3.打開凝膠成像系統(tǒng)前面板,選擇使用紫外透射光源或者白光透射光源,將相應光源安放到位。
4.將樣品放置在透射光源的樣品臺上。
5.在成像操作界面里面選擇使用Upperwhite光源,點擊綠色(即時成像)按鈕。
四、是不是像素越高,產品就越好?
像素是要針對成像設備來看的,比如數碼相機與CCD的像素就不具備可比性,其次CCD本身的質量比單純的像素高低更重要。對于同級別CCD***重要的指標是其大小,也就是CCD尺寸,尺寸越大其本身價值就成幾何倍地增長。
五、配件紫外反射燈源的主要用途為何?
紫外反射燈源使用并不廣泛,主要是提供非透明材質的DNA跑膠載體如紙層析等的成像需要而使用。由于比較常用的還是透明的瓊脂糖凝膠與聚丙烯酰胺凝膠,透射光源**可以滿足,因此將紫外反射光源作為選配件不列入標配中。
六、為何要采用自動變焦鏡頭,有何意義?
自動變焦鏡頭無需手動調節(jié),可操作性強,同時也減少了EB潛在的污染機會。再者使得將CCD內置成為了可能,從而達到防灰防塵防震的目的,更好地保護了核心部件延長產品的使用壽命。
七、如何看待CCD的一些主要技術參數?
CCD的主要技術參數有CCD尺寸,有效像素,信噪比,采集位數等。其中CCD尺寸與信噪比都是影響成像的關鍵因素,尺寸越大能接受的信號就越多。而熱噪音越低,信噪比就越高,成像質量也就越好。采集位數指色彩灰度的表達范圍。如采集位數為8則表示有2的8次方數量的灰度來還原色彩。
八、紫外對人體有傷害,是否具有防護措施?
紫外對人體,特別是眼睛有**傷害,TOCAN凝膠成像系統(tǒng)具備紫外防護設施,在紫外燈開啟的狀態(tài)下,如不慎打開暗箱,紫外燈會自動熄滅防止對人體的傷害。
九、能否在凝膠成像上直接切膠?
TOCAN凝膠成像可以,如需直接切膠,首先按系統(tǒng)中間的觀察窗,打開裝有進口防紫外玻璃的觀察窗口,然后打開左右兩側專為割膠所設計的小門,即可進行切膠操作。
10、如何調節(jié)焦距 聚焦 光圈以獲得高質量的圖片?
三個***重要的可調參數分別是焦距聚焦和光圈。其中焦距調節(jié)清晰度,聚焦調節(jié)圖像大小,光圈調節(jié)明暗。一般先把光圈調節(jié)到適宜的亮度后,再調節(jié)聚焦將圖像放到**,***后調解焦距,在圖像較大的情況下焦距比較容易調節(jié)到***清晰狀態(tài),然后再把圖像縮放在適宜大小后成像即可。
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凝膠成像系統(tǒng)的應用如何?凝膠成像系統(tǒng)可以用于蛋白質、核酸、多肽、氨基酸、多聚氨基酸等其他生物分子的分離純化結果作定性分析。
(1)分子量定量
對于一般常用的DNA膠片,利用分子量定量功能,通過對膠上DNA Marker條帶的已知分子量注釋,自動生成擬合曲線,并以它衡量得到未知條帶的分子量。通過這種方法所得到的結果較肉眼觀察估計要準確很多。
(2)密度定量
一般常用的測定DNA(脫氧核糖核酸)和RNA(核糖核酸)濃度的方法是紫外吸收法,但它只能測定樣品中的總核苷酸濃度,而不能區(qū)分各個長度片段的濃度。
利用凝膠成像系統(tǒng)和軟件,先將DNA膠片上某一已知其DNA含量的標準條帶進行密度標定以后,可以方便的單擊其他未知條帶,根據與已知條帶的密度做比較,可以得到未知DNA的含量。此方法也適用于對PAGE蛋白膠條帶的濃度測定。
(3)PCR定量
PCR定量主要是指,如果PCR實驗擴增出來的條帶不是一條,那么可以利用軟件計算出各個條帶占總體條帶的相對百分數。
就此功能而言,與密度掃描類似,但實際在試驗方法上并不相同。PCR定量是對選定的幾條帶進行相對密度定量并計算其占總和的百分數,密度掃描時并對選擇區(qū)域生成縱向掃描曲線圖并積分。
(4)密度掃描
在分子生物學和生物工程研究中,***常用到的是對蛋白表達產物占整個菌體蛋白的百分含量的計算。
傳統(tǒng)的方法是利用專用的密度掃描,但利用生物分析軟件結合現(xiàn)在實驗室常規(guī)配備的掃描儀或者直接用白光照射的凝膠成像就能完成此項工作。