熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用**波長的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像

(一)光源

現(xiàn)在多采用200W的超高壓汞燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充**數(shù)量的汞，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當(dāng)水銀**蒸發(fā)時(shí)，可達(dá)50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

超高壓汞燈也散發(fā)大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環(huán)境溫度不宜太高。

新型超高壓汞燈在使用初期不需高電壓即可引燃，使用一些時(shí)間后，則需要高壓啟動(dòng)(約為15000V)，啟動(dòng)后，維持工作電壓一般為50～60V，工作電流約4A左右。200W超高壓汞燈的平均壽命，在每次使用2h的情況下約為200h，開動(dòng)一次工作時(shí)間愈短，則壽命愈短，如開一次只工作20min，則壽命降低50%。因此，使用時(shí)盡量減少啟動(dòng)次數(shù)。燈泡在使用過程中，其光效是逐漸降低的。燈熄滅后要等待冷卻才能重新啟動(dòng)。點(diǎn)燃燈泡后不可立即關(guān)閉，以免水銀蒸發(fā)不**而損壞電極，一般需要等15min。由于超高壓汞燈壓力很高，紫外線強(qiáng)烈，因此燈泡必須置燈室中方可點(diǎn)燃，以免傷害眼睛和發(fā)生爆炸時(shí)造成操作。

超高壓汞燈(100W或200W)光源的電路和包括變壓、鎮(zhèn)流、啟動(dòng)幾個(gè)部分。在燈室上有調(diào)節(jié)　燈泡發(fā)光**的系統(tǒng)，燈泡球部后面安裝有鍍鋁的凹面反射鏡，前面安裝有集光透鏡。

國產(chǎn)超高壓汞燈GCQ-200型性能良好，可以代替HBO-200等型的進(jìn)口燈泡，平均壽命在200h以上，價(jià)格也比較低。 我國研制的一種簡易輕便型高色溫溴鎢熒光光源裝置，體積小，重量輕，功率小，交、直流兩用(自帶直流電源)，易于攜帶，使用方便，已推廣應(yīng)用。

(二)濾色系統(tǒng)

濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部位，由激發(fā)濾板和壓制濾板組成。濾板型號(hào)，各廠家名稱常不統(tǒng)一。濾板一般都以基本色調(diào)命名，前面字母代表色調(diào)，后面字母代表玻璃，數(shù)字代表型號(hào)特點(diǎn)。如德國產(chǎn)品(Schott)BG12，就是種藍(lán)色玻璃，B是藍(lán)色的**個(gè)字母，G是玻璃的**個(gè)字母；我國產(chǎn)品的名稱已統(tǒng)一用拼音字母表示，如相當(dāng)于BG12的藍(lán)色濾板名為QB24，Q是青色(藍(lán)色)拼音的**個(gè)字母，B是玻璃拼音的**個(gè)字母。不過有的濾板也可以透光分界濾長命名，如K530，就是表示壓制濾長530nm以下的光而透過530nm以上的光。還有的廠家的濾板**以數(shù)字命名，如美國Corning廠的NO：5-58，即相當(dāng)于BG12。 1．激發(fā)濾板　 根據(jù)光源和熒光色素的特點(diǎn)，可選用以下三類激發(fā)濾板，提供**波長范圍的激發(fā)光。

紫外光激發(fā)濾板：此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。常用型號(hào)為UG-1或UG-5，外加一塊BG-38，以除去紅色尾波。

紫外藍(lán)光激發(fā)濾板：此濾板可使300～450nm范圍內(nèi)的光通過。常用型號(hào)為ZB-2或ZB-3，外加BG-38。

紫藍(lán)光激發(fā)濾板：它可使350～490nm的光通過。常用型號(hào)為QB24(BG12)。

**吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達(dá)明色素)可用藍(lán)綠濾板(如B-7)激發(fā)。

近年開始采用金屬膜干涉濾板，由于針對性強(qiáng)，波長適當(dāng)，因而激發(fā)效果比較玻璃濾更好。如西德Leitz廠的FITC專用KP490濾板和羅達(dá)明的S546綠色濾板，均遠(yuǎn)比玻璃濾板效果好。

激發(fā)濾板分薄厚兩種，一般暗視野選用薄濾板，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。基本要求是以獲得***明亮的熒光和***好的背景為準(zhǔn)。

2．壓制濾板 壓制濾板的作用是**阻擋激發(fā)光通過，提供相應(yīng)濾長范圍的熒光。與激發(fā)濾板相對應(yīng)，常用以下3種壓制濾板：

紫外光壓制濾板：可通過可見光、阻擋紫外光通過。能與UG-1或UG-5組合。常用GG-3K430或GG-6K460。

紫藍(lán)光壓制濾板：能通過510nm以上濾長的熒光(綠到紅)，能與BG-12組合。通常用OG-4K510或OG-1K530。

紫外紫光壓制濾板：能通過460nm以上波長的熒光(藍(lán)到紅)，可與BG-3組合，常用OG-11K470AK 490，K510。

(三)反光鏡

反光鏡的反光層一般是鍍鋁的，因?yàn)殇X對紫外光和可見光的藍(lán)紫區(qū)吸收少，反射達(dá)90%以上，而銀的反射只有70%；一般使用平面反光鏡。

(四)聚光鏡

專為熒光顯微鏡設(shè)計(jì)制作的聚光器是用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成。分明視野聚光器的暗視野聚光器兩種。還有相差熒光聚光器。

1．明視野聚光器　 在一般熒光顯微鏡上多用明視野聚光器，它具有聚光力強(qiáng)，使用方便，特別適于低、中倍放大的標(biāo)本觀察。

2．暗視野聚光器 　暗視野聚光器在熒光顯微鏡中的應(yīng)用日益廣泛。因?yàn)榧ぐl(fā)光不直接進(jìn)入物鏡，因而除散射光外，激發(fā)光也不進(jìn)入目鏡，可以使用薄的激發(fā)濾板，增強(qiáng)激發(fā)光的強(qiáng)度，壓制濾板也可以很薄，因紫外光激發(fā)時(shí)，可用無色濾板(不透過紫外)而仍然產(chǎn)生黑暗的背景。從而增強(qiáng)了熒光圖像的亮度和反襯度，提高了圖像的質(zhì)量，觀察舒適，可能發(fā)現(xiàn)亮視野難以分辨的細(xì)微熒光顆粒。

3．相差熒光聚光器　 相差聚光器與相差物鏡配合使用，可同時(shí)進(jìn)行相差和熒光聯(lián)合觀察，既能看到熒光圖像，又能看到相差圖像，有助于熒光的定位準(zhǔn)確。一般熒光觀察很少需要這種聚光器。

(五)物鏡

各種物鏡均可應(yīng)用，但***好用消色差的物鏡，因其自體熒光極微且透光性能(波長范圍)適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比，而與其放大倍數(shù)成反比，所以為了提高熒光圖像的亮度，應(yīng)使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大 時(shí)其影響非常明顯。因此對熒光不夠強(qiáng)的標(biāo)本，應(yīng)使用鏡口率大的物鏡，配合以盡可能低的目鏡(4×,5×，6.3×等)。

(六)目鏡

在熒光顯微鏡中多用低倍目鏡，如5×和6.3×。過去多用單筒目鏡，因?yàn)槠淞炼缺入p筒目鏡高一倍以上，但目前研究型熒光顯微鏡多用雙筒目鏡，觀察很方便。

(七)落射光裝置

新型的落射光裝置是從光源來的光射到干涉分光濾鏡后，波長短的部分(紫外和紫藍(lán))由于濾鏡上鍍膜的性質(zhì)而反射，當(dāng)濾鏡對向光源呈45。傾斜時(shí)，則垂直射向物鏡，經(jīng)物鏡射向標(biāo)本，使標(biāo)本受到激發(fā)，這時(shí)物鏡直接起聚光器的作用。同時(shí)，濾長長的部分(綠、黃、紅等)，對濾鏡是可透的，因此，不向物鏡方向反射，濾鏡起了激發(fā)濾板作用，由于標(biāo)本的熒光處在可見光長波區(qū)，可透過濾鏡而到達(dá)目鏡觀察，熒光圖像的亮度隨著放大倍數(shù)增大而提高，在高放大時(shí)比透射光源強(qiáng)。它除具有透射式光源的功能外，更適用于不透明及半透明標(biāo)本，如厚片、濾膜、菌落、組織培養(yǎng)標(biāo)本等的直接觀察。近年研制的新型熒光顯微鏡多采用落射光裝置，稱之為落射熒光顯微鏡。

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相關(guān)熱詞：

等離子清洗機(jī),反應(yīng)釜,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,高精度溫濕度計(jì),露點(diǎn)儀,**液相色譜儀價(jià)格,霉菌試驗(yàn)箱,跌落試驗(yàn)臺(tái),離子色譜儀價(jià)格,噪聲計(jì),高壓**器,集菌儀,接地電阻測試儀型號(hào),柱溫箱,旋渦混合儀,電熱套,場強(qiáng)儀**材料試驗(yàn)機(jī)價(jià)格,洗瓶機(jī),勻漿機(jī),耐候試驗(yàn)箱,熔融指數(shù)儀,透射電子顯微鏡。

顯微鏡是一種精密的光學(xué)儀器，因此在正確使用的同時(shí)，做好顯微鏡的日常維護(hù)和保養(yǎng)，也是非常重要的一環(huán)。注重顯微鏡的良好維護(hù)和保養(yǎng)，可以延長顯微鏡的使用時(shí)間并確保顯微鏡能始終處于良好的工作狀態(tài)中。

儀器的保養(yǎng)

保持光學(xué)元件的清潔對于保證好的光學(xué)性能來說非常重要，當(dāng)顯微鏡不用時(shí)，顯微鏡應(yīng)當(dāng)用儀器提供的防塵罩蓋住。若光學(xué)表面及儀器有灰塵和污物，在擦清表面前應(yīng)當(dāng)先用吹氣球吹去灰塵或用柔軟毛刷去污物。

光學(xué)表面應(yīng)當(dāng)用無絨棉布，鏡頭紙或用專用的鏡頭清潔液沾濕的棉花簽來清潔。請避免使用過多的溶劑，擦鏡紙或棉花簽應(yīng)恰當(dāng)沾濕溶劑但不要因?yàn)槭褂锰嗳軇┒鴿B透到物鏡內(nèi)，造成物鏡清晰度下降及物鏡損壞。

顯微鏡中目鏡物鏡的表面鏡頭***容易受到灰塵和污物及油的粘污，當(dāng)發(fā)現(xiàn)襯度，清晰度降低，霧狀發(fā)生時(shí)，則需要用放大鏡仔細(xì)檢查目鏡，物鏡前面鏡頭的狀況。

低倍物鏡有相當(dāng)大的前組鏡片，能用纏在手指上的棉布或棉簽及擦鏡紙上用乙醇沾濕來擦拭。40X、100X需多加小心地用放大鏡仔細(xì)檢查。高倍鏡中為了達(dá)到高的平坦度，應(yīng)用了一個(gè)有小曲率半徑凹面的前組鏡頭，在擦拭這組鏡頭時(shí)用帶有棉球的牙簽或棉花簽清潔。擦拭鏡頭表面要輕。不要過度用力和有刮擦動(dòng)作，并確信棉簽觸到鏡頭的凹面。在清理后用放大鏡檢查物鏡是否損傷，如果必須要去開觀察鏡筒，小心不要接觸到鏡筒下面的外露鏡頭，鏡頭表面如有手指印會(huì)降低成像的清晰度，用清潔物目鏡的方法進(jìn)行擦拭。

當(dāng)顯微鏡使用100X油鏡使用完時(shí)，請及時(shí)將油鏡表面擦拭清楚并檢查40X物鏡是否沾上油，如有請及時(shí)擦清。使顯微鏡始終保持成像清晰。

儀器的維護(hù)

使用防塵罩是保證顯微鏡處于良好機(jī)械和物理狀態(tài)的***重要的因素。顯微鏡的外殼如有污跡，能用乙醇或肥皂水來清潔（無用其他有機(jī)溶劑來清潔），但切勿讓這些清洗液滲入顯微鏡內(nèi)部，造成顯微鏡內(nèi)部電子部件的短路或燒毀。

保持顯微鏡使用場地的干燥，當(dāng)顯微鏡長期工作在濕度較大的環(huán)境中，還是容易增加霉變的幾率，因此如顯微鏡不得不工作在這些濕度較大的環(huán)境中，建議使用去濕機(jī)。另外，如發(fā)現(xiàn)光學(xué)元件表面有霧狀，霉斑等不良情況時(shí)，請立刻聯(lián)系專業(yè)人士，對您的顯微鏡進(jìn)行專業(yè)維護(hù)保養(yǎng)。

儀器保養(yǎng)注意事項(xiàng)

采取下列措施，或許能更好的延長您的顯微鏡使用時(shí)間并使之保持良好的工作狀態(tài)。

（1）每次關(guān)閉顯微鏡電源前，請將顯微鏡燈光調(diào)至***暗。

（2）關(guān)閉顯微鏡電源后，請等燈箱**冷卻后（約15分鐘后），在罩上顯微鏡防塵罩。

（3）開啟顯微鏡電源后，若暫時(shí)不使用，可以將顯微鏡燈光調(diào)至***暗，而無需頻繁開關(guān)顯微鏡電源。

顯微鏡工作一年后，應(yīng)每年至少做一次的專業(yè)維護(hù)保養(yǎng)。

儀器日常使用注意事項(xiàng)

1.搬動(dòng)顯微鏡時(shí)，要一手握鏡臂，一手扶鏡座，兩上臂緊靠胸壁。切勿一手斜提，前后擺動(dòng)，以防鏡頭或其他零件跌落。

2.觀察標(biāo)本時(shí)，顯微鏡離實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣應(yīng)保持**距離(5cm)，以免顯微鏡翻倒落地。鏡柱與鏡臂間的傾斜角度不得超過45度，用完立即還原。

3.使用時(shí)要嚴(yán)格按步驟操作，熟悉顯微鏡各部件性能，掌握粗、細(xì)調(diào)節(jié)鈕的轉(zhuǎn)動(dòng)方向與鏡筒升降關(guān)系。轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)鈕向下時(shí)，眼睛必須注視物鏡頭。

4.觀察帶有液體的臨時(shí)標(biāo)本時(shí)要加蓋片，不能使用傾斜關(guān)節(jié)，以免液體污染鏡頭和顯微鏡。

5.粗、細(xì)調(diào)節(jié)鈕要配合使用，細(xì)調(diào)節(jié)鈕不能單方向過度旋轉(zhuǎn)，調(diào)節(jié)焦距時(shí)，要從側(cè)面注視鏡筒下降，以免壓壞標(biāo)本和鏡頭。

6.用單筒顯微鏡觀察標(biāo)本，應(yīng)雙眼同時(shí)睜開，左眼觀察物像，右眼用以繪圖，左手調(diào)節(jié)焦距，右手移動(dòng)標(biāo)本或繪圖。

7.禁止隨意擰開或調(diào)換目鏡、物鏡和聚光器等零件。

8.顯微鏡光學(xué)部件有污垢，可用擦鏡紙或綢布擦凈，切勿用手指、粗紙或手帕去擦，以防損壞鏡面。

9.凡有腐蝕性和揮發(fā)性的化學(xué)試劑和藥品，如碘、乙醇溶液、酸類、堿類等都不可與顯微鏡接觸，如不慎污染時(shí)，應(yīng)立即擦干凈。不要任意取下目鏡，謹(jǐn)防灰塵落入鏡筒。

10.使用油鏡觀察樣品后，隨即用二甲苯將油鏡鏡頭和載波片擦凈，以防其他的物鏡玻璃上沾上香柏油。二甲苯有毒，使用后馬上洗手。

11.實(shí)驗(yàn)完畢，要將玻片取出，用擦鏡紙將鏡頭擦拭干凈后移開，不能與通光孔相對。用綢布包好，放回鏡箱。切不可把顯微鏡放在直射光線下曝曬。

生物顯微鏡的日常維護(hù)

　　1、生物顯微鏡的安放應(yīng)選擇干燥清潔的房間，以避免光學(xué)部件發(fā)霉、金屬部分生銹以及粘滿灰塵。顯微鏡使用完畢后，即放回箱（柜）內(nèi)，或用玻璃罩、塑料套罩住，并放入干操劑。

　　2、不要自行拆卸各部件；鏡筒要插上接目鏡或益上鐐苗蓋，避免灰塵從鏡筒上部進(jìn)入；透鏡表面不要用手指碰觸或拭擦，如有灰塵，先用柔軟毛筆輕輕拂去，再用柔軟的清潔細(xì)布拭撩，也可用擦鏡紙蘸少許二甲苯或石油迷試擦，但注意不要在透鏡表面劃出條紋。如鏡片有輕度長霉，用擦繞紙擦不去時(shí)，可用棉簽蘸少許70％乙醇與30％乙迷混合液輕輕拭撩。

　　3、生物顯微鏡不可與腐蝕性酸類、減類或揮發(fā)性強(qiáng)的化學(xué)藥品放在一起，以免被腐蝕，縮短使用年限。原則上，當(dāng)觀察含液體的標(biāo)本時(shí)，一般都要蓋上蓋玻片；若液體中含有酸、堿等腐蝕性化學(xué)物質(zhì)時(shí)，應(yīng)把蓋玻片的四周用石蠟或凡士林封住，然后觀察。但由于進(jìn)行中藥顯微鑒定時(shí)，經(jīng)常要用這一類試劑，不可能都封固，因此要特別小心，防止液體流到載物臺(tái)上，吏不要沾到物鏡上。

　　4、生物顯微鏡不應(yīng)在直射陽光下暴曬，也不要放在靠近爐子或暖氣的地方，以避免過劇的冷熱變化引起透鏡和機(jī)件的脫膠、變形或損壞。

　　5、清潔接物鏡只限于外表面。接物面被藥品污染后即用撩鏡紙蘸少許擦鏡液拭擦（不要用乙醇）；若背面須清潔時(shí)，可用柔軟毛筆拂拭，或用皮吸頭吸去灰塵。

　　6、轉(zhuǎn)動(dòng)粗細(xì)調(diào)比鋁調(diào)焦時(shí)，動(dòng)作要緩慢，不要壓碎蓋被片，以防接物鏡和集光器受控?fù)舳鴵p壞。

　　7、使用油鏡后，須將鏡頭上的香柏油拭探干凈（可用擦鏡紙蘸少許二甲苯拭擦，但注怠二甲苯不能滲入鏡頭內(nèi)部，否則二甲苯溶解透鏡之間的粘合劑，可使鏡片脫落）。

　　8、反光鏡鏡面要保護(hù)清潔，不要使水、二甲苯或香柏油透入，以免反光鏡的水銀脫落。

　　9、加機(jī)械部分不靈活，可用細(xì)綢布蘸二甲苯少鈞：拭去銹和油膩（不得用乙醇，因?yàn)檫@些溶劑會(huì)侵蝕油漆），再用少許液體石服潤滑；旋扭過緊不要強(qiáng)行扭動(dòng)，以免損壞。

　　10、有時(shí)在生物顯微鏡的視野中發(fā)現(xiàn)有污點(diǎn)或異物，可先轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，如果這些污點(diǎn)跟著旋轉(zhuǎn)，則可確定污點(diǎn)是在目鏡上；否則，可移動(dòng)標(biāo)本片，如污點(diǎn)跟著移動(dòng)，則污點(diǎn)是在標(biāo)本片上。如果兩者都不是，則污點(diǎn)是在物鏡上，可先撿食物鏡的前鏡頭，然后檢查后鏡頭。根據(jù)不問情況進(jìn)行清潔處理。

　　有時(shí)視野的一部分不清晰，這可能是物鏡或目鏡的前透鏡表面有指印或灰塵，也可能是標(biāo)本片做得不好或顯微鏡用法不當(dāng)，如照明系統(tǒng)末調(diào)好等原因，應(yīng)查明情況，分別解決。

　　11、生物顯微鏡用畢后，應(yīng)將各部分擦拭干凈，格接物鏡轉(zhuǎn)成八字形，然后將鏡筒和集光器下降固定，再將反光鏡的鏡面置垂直的位置。