離子色譜柱管內(nèi)填有顆粒大小均勻的固定相，一般商品化離子色譜柱填料主要用5~15μm顆粒的高分子聚合物小球，特定場合下也采用無機氧化物（如硅膠）顆粒；

目前離子色譜柱所用填料的顆粒主要為球形，而針對填料表面結構性質（孔隙的大小），填料可以分離微孔型、大孔型和超孔型，隨著離子色譜應用于復雜樣品越來越多，對離子色譜柱的交換容量要求也越來越高，超孔型填料也是離子色譜的一個發(fā)展趨勢。

陰離子色譜柱操作注意事項

(1)必須在色譜柱的流路管線**充滿淋洗液后才能將色譜柱連接到色譜儀上。

(2)按色譜柱上標識的流路方向連接色譜柱。

(3)淋洗液中可添加適量的有機溶劑進行改性(低于50%乙腈或甲醇等)。

(4)推薦使用溫度是35C，建議配備柱溫箱使用。溫度與各離子的洗脫時間有**相關性，溫度改變，離子的洗脫時間會有所變化。

(5)開泵后保持流量低于0.5mLUmin，之后逐漸增加流量至工作流量。

(6)含有有機物和雜質的樣品，請先對樣品進行前處理后再進樣分析。

陰離子色譜柱特點

陰離子色譜柱是款高容量，**，疏水性陰離子交換色譜柱。用于分離大范圍價態(tài)陰離子，包括多磷酸鹽,聚磷酸酯,和其他多價的復雜試劑如EDTA和NTA。

使用的多磷酸鹽，和螯合劑在復雜樣品矩陣。

硫化物確定使用氫氧化鈉和廢水樣品安培檢測。

分析使用的六價鉻柱后反應和環(huán)境介質吸收可見光檢測，包括廢水鉻，飲用水和空氣。

獨立的無機和有機種飲用水中砷和尿液樣本。

高容量，更高分辨率。

需要更長的保留時間，但是分離度更高。

促進良好表征樣品中有機酸和陰離子的快速分析。

特別適合分離復雜樣品基質或未表征樣品中的有機酸和陰離子。

建議用于一價和二價有機酸。

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當色譜柱使用一段時間以后，柱內(nèi)由于各種原因，滯留了一些高沸點組分或氧化物等，除柱效有所下降外，還可能出現(xiàn)基線波動或“鬼峰”。為了去除污染物，使柱效和基線恢復到原來的狀態(tài)，稱為色譜柱的再生。色譜柱的再生和柱老化有**區(qū)別和不同，它是柱在使用一段時間柱性能下降，經(jīng)處理后盡量恢復到原來性能的過程。A、色譜柱在以下幾種情況必須再生處理a.使一段時間，柱效明顯下降；b.柱被污染，特別是在程序升溫時，基線漂移和噪聲超過容忍程度或出現(xiàn)“鬼峰”；c.柱頭塌陷，柱床短路或斷位(在玻璃柱中容易發(fā)現(xiàn))，而出現(xiàn)尖峰或雙重峰；d.峰形展寬，保留時間明顯變化；e.待分離組分和固定相表面非特異性相互作用，引起保留時間較短的峰拖尾或出現(xiàn)雙峰；B、毛細管柱再生的幾種方法a.用載氣將色譜柱污染物沖洗出來；b.將柱頭截去100mm 或更長一些；c.若使用交聯(lián)的色譜柱，可在儀器上反復注射溶劑進行沖洗。常用的溶劑依次為丙酮、甲苯、乙醇、氯仿和二氯甲烷，每次可進樣5～10μL；d.交聯(lián)柱在儀器上沖洗無效時，可把柱拆下來用二氯甲烷或氯仿沖洗，溶劑用量視柱的污染程度而定，一般20mL 左右。C、色譜柱再生前應注意的問題當分析出現(xiàn)問題時，不能只考慮是柱問題，而馬上進行再生。除上述情況外，還應考慮樣品處理、進樣技術、操作有無失誤、數(shù)據(jù)處理參數(shù)有無改變等可能帶來的問題。a.襯管、預柱和檢測器被污染也會引起基線不穩(wěn)定、出現(xiàn)“鬼峰”或裂解峰；b.新的注射墊也會引起基線漂移和出現(xiàn)“鬼峰”；c.襯管密封欠佳、柱安裝死體積或檢測器固有特性也會引起較早出現(xiàn)峰的拖尾；d.分析系統(tǒng)發(fā)生變化(如漏氣嚴重)也可能使保留時間突變；e.峰變寬，除柱效下降外也可能由柱外效應引起；f.進樣量太大也會引起峰變寬、拖尾或保留時間變短；g.色譜柱長時間樣品過載，保留時間也會變小等。D、色譜柱再生時應注意的幾個問題1.如前所述和色譜柱老化一樣，不是溫度越高越好，時間越長越好；建議不要使用長時間烘烤的方法，來處理受到污染的色譜柱，因為烘烤時，溫度會把污染的殘留物變成不能溶解的物質，再用溶劑清洗也無濟于事；2.儀器在高靈敏度操作時，如：量程在1×10-11A/mV以下，痕量分析程序升溫過程中，溫度升到大于180℃后，基線明顯漂移是不可避免的；3.不同類型柱子，再生方法不同；4.樣品種類、組分、進樣量不同或操作時間長短不同，再生方法也不同；5.儀器本身條件如：氣源種類、純度、凈化條件、進樣口結構和操作檢測器不同，再生柱方法也有區(qū)別；6.高分子量組分污染色譜柱后，高溫再生時間長會導致固定相的老化；使用交聯(lián)或鍵合柱***好用溶劑漂洗再生，漂洗溶劑流動方向**要從柱出口注入。應該注意，毛細管柱交聯(lián)鍵合率通常不到90%，因此會漂洗掉未化學結合的液相部分，所以保留時間和分離狀態(tài)會有所變化；7.對于難揮發(fā)物，碳化物是不能通過再生除去，對于填充柱***好使用帶襯管氣化室進樣器，對于毛細管可通過把柱入口切去30～50cm的方法除去污物段。有條件的可以使用預柱，把不揮發(fā)的有機物、無機物和顆粒材料阻留在預柱中，需要時更換預柱；8.在某些情況下，色譜柱要在溫度極限附近使用，這時基線漂移和大噪聲已不可避免，柱的再生要求只能視情況而定；9.不是所有色譜柱通過再生均能恢復原來性能。

色譜柱的柱效下降會有什么現(xiàn)象?

　　柱效(columnefficiency)，是指色譜柱保留某一化合物而不使其擴散的能力。柱效能是一支色譜柱得到窄譜帶和改善分離的相對能力。

　　柱效，從名字上理解是色譜柱的分離效果。色譜柱的有效塔板數(shù)越大或有效的塔板高度越低，色譜柱的柱效越好，類似于每個塔板的分離效率相同，有效塔板數(shù)越多，***終得到的物質越純。

　　柱效率是指溶質通過色譜柱之后其區(qū)域寬度增加了多少，它與溶質在兩相中的擴散及傳質情況有關，這是所謂色譜的動力學過程。

　　怎么計算和直觀的提現(xiàn)?

　　從塔板概念評價柱效

　　根據(jù)塔板理論，可以計算一根色譜柱所達到的理論塔板數(shù)，或表達為每米理論塔板數(shù)n/m。把相當于一個理論塔板的柱子長度稱作理論塔板高度H，通常采用有效塔板數(shù)N和有效塔板高度L來表達柱效，W為峰寬,W1/2為半峰寬：

　　N=16(Tr/W)^2

　　=5.54(Tr/W(1/2))^2

　　=L/H

　　顯然，N值越大，或H值越小，柱效越高。分散效果主要取決于所選擇的固定相。

　　從柱的算公式上我們可以看出柱效主要跟理論塔板數(shù)和柱長有關系。我們來解釋一下理論塔板數(shù)。

　　理論塔板數(shù)(theoreticalplatenumber)，N是色譜柱效的參數(shù)之一,用于定量表示色譜柱的分離效率(簡稱柱效)。N取決于固定相的種類、性質(粒度、粒徑分布等)、填充狀況、柱長、流動相的種類和流速及測定柱效所用物質的性質。如果峰形對稱并符合正態(tài)分布，N可近似表示為：

　　理論塔板數(shù)=5.54(保留時間/半高峰寬)2(2是平方)

　　柱效率用理論塔板數(shù)定量地表示：N=16*(t/w)2。其中，t是溶質從進樣到**洗脫峰出現(xiàn)的時間，w為該溶質的洗脫峰在基線處的寬度。在一色譜柱中用相同的洗脫條件時候，不同化合物的滯留時間與其洗脫峰寬度之比接近常數(shù)。因此理論塔板數(shù)大的色譜柱效率高。當然，N的大小和柱子長度有密切關系：理論塔板高度H=柱長/N，用H可以衡量單位長度的色譜柱的效率，H越小，則色譜柱效率越高。。。N為常量時，W隨tR成正比例變化。在一張多組分色譜圖上，如果各組份含量相當，則后洗脫的峰比前面的峰要逐漸加寬，峰高則逐漸降低。

　　用半峰寬計算理論塔板數(shù)比用峰寬計算更為方便和常用，因為半峰寬更容易準確測定，尤其是對稍有拖尾的峰。

　　N與柱長成正比，柱越長，N越大。用N表示柱效時應注明柱長，，如果未注明，則表示柱長為1米時的理論塔板數(shù)。(一般HPLC柱的N在1000以上。)若用調整保留時間(tR’)計算理論塔板數(shù)，所得值稱為有效理論塔板數(shù)(N有效或Neff)=16(tR’/W)

　　離子色譜柱的柱效一般由硫酸根的理論塔板數(shù)來計，理論塔板數(shù)可以由色譜儀工作站直接讀出，一般離子色譜柱的柱效大于1000個塔板數(shù).

　　柱效下降會有什么現(xiàn)象?

　　1.看峰分離度，分離度直接關系測試結果準確性，可以判斷柱效是否下降，柱效下降分離度一般會變差。

　　2.測定色譜柱的塔板數(shù)來判斷

　　3.通過壓力變化和出峰時間來判斷，一般柱效下降時伴隨著柱壓的升高和降低，此時出峰的時間也會和之前有很大差異。

　　4.還可以根據(jù)新的柱子的保留時間判斷,看重復性,平行性如何.

　　5.通過譜圖峰型的變化，是否有嚴重前伸和拖尾現(xiàn)象，如果峰型很差了，柱效已經(jīng)下降了

　　柱效下降后如何來提高柱效。

　　離子交換柱長時間在緩沖溶液中使用和進樣,將導致色譜柱離子交換能力下降,.用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生.另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗.但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復到新柱的水平的.如果柱子裝反了,可以調回來,但可能會造成柱內(nèi)擔體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。