液相色譜流動相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi),不能貯存在塑料容器中。因為許多有機溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料中的增塑劑,導(dǎo)致溶劑被污染。被污染的溶劑如用于液相色譜系統(tǒng),可能造成柱效降低。貯存容器**要蓋嚴(yán),防止溶劑揮發(fā)引起組成的變化,同時防止空氣中的氧和二氧化碳溶入流動相中。磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液極易長霉,應(yīng)盡量新鮮配制使用。如需貯存,可至于冰箱內(nèi)冷藏,并且一般不要超過3天。鹵代溶劑中可能含有微量的酸性雜質(zhì),能與液相色譜儀系統(tǒng)中的不銹鋼反應(yīng)。鹵代溶劑與水的混合物比較容易分解,不能存放太久。鹵代溶劑混合后,可能會反應(yīng)生成一些對不銹鋼有較大腐蝕性的化合物。因此,盡量不采用鹵代溶劑的混合流動相,或者使用之前新鮮配制。此外,鹵代溶劑與一些反應(yīng)性有機溶劑(如乙腈)混合靜置時,還可能產(chǎn)生結(jié)晶。貯液器是裝預(yù)混合流動相或流動相組分的容器,構(gòu)造相對簡單,但用于不合適的貯液器也可能帶來問題。貯液器被污染了可能阻塞燒結(jié)不銹鋼過濾片,影響液相色譜儀泵性能,在色譜圖種出現(xiàn)多余的峰或者產(chǎn)生噪聲。貯液器的容積一般為1L,有的貯液器僅能用于沖氦氣,而不能用于真空脫氣,因為有破裂的危險。用于真空脫氣的貯液器要加厚或者加外套。自備的貯液器要松松地蓋上蓋子,以擋灰塵。蓋得太緊會形成部分真空,使泵停止運轉(zhuǎn)。
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液相色譜填料的粒度選擇現(xiàn)代**液相色譜中,分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,首先必須對此有**的認(rèn)識和了解。
液相色譜填料可以是陶瓷性質(zhì)的無機物基質(zhì),也可以是有機聚合物基質(zhì)。液相色譜填料中的有機物基質(zhì)主要是硅膠和氧化鋁。無機物基質(zhì)剛性大,在溶劑中不容易膨脹。
液相色譜填料中有機聚合物基質(zhì)主要有交聯(lián)苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有機聚合物基質(zhì)剛性小、易壓縮,溶劑或溶質(zhì)容易滲入有機基質(zhì)中,導(dǎo)致填料顆粒膨脹,結(jié)果減少傳質(zhì),***終使柱效降低。
液相色譜填料的粒度選擇
液相色譜填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數(shù),即柱效和背壓。粒度越小,填充柱的柱效越高;然而粒度越小,柱壓越大,柱壓的增加限制了粒度小于3μm的填料應(yīng)用。在相同選擇性條件下,提高柱效可提高分離度,但不是**的因素。如果固定相選擇是正確,但是分離度不夠,那么選用更小粒度的填料是很有用的。3μm填料填充柱的柱效比相同條件下的5μm填料的柱效提高近30%;然而,3μm的色譜柱的背壓卻是5μm的2倍。與此同時,柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱,以縮短分析時間。另外,可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色譜柱的壓力。