紫外-可見光檢測(cè)器是應(yīng)用***廣泛的檢測(cè)器,遵循的試驗(yàn)方法是Beer’s Law - BEER定律,即光能量P0 = 透過溶劑的光能量, P = 透過樣品的光能量,光通量(透過率%) T=P/P0,吸光度 A = -log(T)=log(P0/P),吸光度 = 單位吸光度 ,即 A = abc,也就是說(shuō)樣品池(S)中的樣品對(duì)光產(chǎn)生吸收有信號(hào)差,如是可變波長(zhǎng)檢測(cè)器還有分光系統(tǒng)(光柵) 同紫外檢測(cè)器靈敏度有關(guān)的因素有信號(hào)強(qiáng)度(S) 和噪音(N)。
從BEER定律可看出信號(hào)強(qiáng)度(S)與樣品的種類、樣品濃度及進(jìn)樣的體積、檢測(cè)池的長(zhǎng)度、所使用的波長(zhǎng)、檢測(cè)器的時(shí)間常數(shù)有關(guān)。
噪音(N)與流動(dòng)相、 所使用的波長(zhǎng)燈的能量、檢測(cè)器的時(shí)間常數(shù)以及非檢測(cè)器因素如電噪音、泵脈動(dòng)等有關(guān)。
紫外檢測(cè)器的靈敏度與溶劑的影響、背景吸收、示差折光效應(yīng)有關(guān),不同種類溶劑有其截止波長(zhǎng),溶劑的質(zhì)量好壞對(duì)其截止波長(zhǎng)有影響,溶劑質(zhì)量與含紫外吸收的雜質(zhì)、溶解在其中的氧氣、緩沖液溶質(zhì)的紫外吸收等因素有關(guān);背景吸收減少線性范圍、許多溶劑會(huì)產(chǎn)生背景吸收,所以應(yīng)該選擇應(yīng)用;示差折光效應(yīng)會(huì)產(chǎn)生假的紫外吸收變化,定量誤差導(dǎo)致光譜圖不準(zhǔn)確,梯度應(yīng)用時(shí)有嚴(yán)重的基線漂移。