【*** 使用手冊】紫外可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法試驗方法，利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進行分析的一種分析儀器，主要由光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理器等部件組成。　　分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu)，其吸收光能量的情況也就不會相同，因此，每種物質(zhì)就有其特有的、固定的吸收光譜曲線，可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量，這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ)?！　∽贤饪梢姺止夤舛扔嫷念愋秃芏啵究梢詺w納為三種類型：單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。　　單光束分光光度計　　其光路經(jīng)單色器分光后的一束平行光，輪流通過參比溶液和樣品溶掖，以進行吸光度的測定。這種類型的分光光度計結(jié)構(gòu)簡單，操作方便，維修容易，適用于常規(guī)分析。國產(chǎn)722型，751型、724型、英國SP500型以及 BackmanDU-8型等均屬于此類光度計?！　‰p光束分光光度計　　其光路經(jīng)單色器分光后經(jīng)反射鏡(M1)分解為弧度相等的兩束光，一束通過參比池，另一束通過樣品池。光度計能自動比較兩束光的強度，此比值即為試樣的透射比，經(jīng)對數(shù)變換將它轉(zhuǎn)換成吸光度并作為波長的函數(shù)記錄下來。雙光束分光光度計一般都能自動記錄吸收光譜曲線。由于兩束光同時分別通過參比池和樣品他，還能自動**光源強度變化所引起的誤差。這類儀器有國產(chǎn)710型、730型和740型，日立220系列，島津-210，英國UNICAMSP-700等等?！　‰p波長分光光度計　　其基本光路由同一光源發(fā)出的光被分成兩束，分別經(jīng)過兩個單色器，得到兩束不同波長的單色光;再利用切光器使兩束光以**的頻率交替照射同一吸收池，然后經(jīng)過光電倍增管和電子控制系統(tǒng)，zui后由顯示器顯示出兩個波長處的吸光度差值ΔA(ΔA=A1-A2)。　　雙波長分光光度計的優(yōu)點在于，對于多組分混合物、混濁試樣(如生物組織液)的分析，以及存在背景于擾或共存組分吸收干擾的情況下，利用雙波長分光光度法，往往能提高方法的靈敏度和選擇性。利用雙波長分光光度計，能獲得導(dǎo)數(shù)光譜。通過光學(xué)系統(tǒng)轉(zhuǎn)換，使雙波長分光光度計能很方便地轉(zhuǎn)化為單波長工作方式。如果能在兩波長處分別記錄吸光度隨時間變化的曲線，還能進行化學(xué)反應(yīng)動力學(xué)研究。 紫外可見分光光度計使用說明

紫外可見分光光度計來自于美國，產(chǎn)品包含光源，單色器，吸收池，檢測器和顯 示器等，它是一款對物質(zhì)進行定性，定量以及結(jié)構(gòu)分析的儀器。這款儀器和人們常 用的可見光光度計有有很大的區(qū)別，除了波長范圍，使用光源都不一樣等，價格也 是后者要要貴一些；平時的使用和注意事項不一樣的，今天就先來學(xué)習(xí)一下紫外可見分光光度計使用方法： 1.試驗中所用的量瓶、移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。 2.使用的石英吸收池必須潔凈。用于盛裝樣品、參比及空內(nèi)溶液的吸收池，當(dāng)裝 入同一溶劑時，在規(guī)定波長測定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配 對使用，否則必須加以校正。 3.取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝盛樣品溶液以池休積的4/5為度，使用 揮發(fā)性溶液吋應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無殘留溶劑。 為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭， 然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水沖洗干凈，晾干防塵保存，吸收池發(fā)現(xiàn)污染不易洗凈時可用硫酸發(fā)煙硝酸(3 ：1V/V)混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用重鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不貧在 清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的重鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學(xué)表面，并 應(yīng)充分甩水沖洗，以防重鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 4.測定前應(yīng)先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長附近是否符合要求，可用 lcm石英吸收池盛溶劑以空氣為空白（即參比光路中不放置**物質(zhì))測定其吸收度 ，應(yīng)符合規(guī)定。 5.稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋 時所取容積一般應(yīng)不少于5cm。含量測定供試品應(yīng)稱取2份，如為對照品比較法，對 照品一般也應(yīng)稱取2份。吸收系數(shù)檢查也應(yīng)稱取供試品2份，平行操作，每份結(jié)果對 平均值的偏差應(yīng)在±0.5%以內(nèi)。作鑒別或檢查可取樣品1份。 6.供試品測定溶液的濃度，除各該品種項下已有注明者外，供試品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之間為宜，吸收度讀數(shù)在此范圍誤差較小，并應(yīng)結(jié)合所用儀器吸收度線 性范圍，配制合適的讀數(shù)濃度。 7.選用儀器的狹縫譜帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度值 會偏低，狹縫寬度的選擇應(yīng)以減小狹縫寬度吋供試品的吸收度不揮增加為準，對于 紫外測定的部分品種，可以使用2nm縫寬，但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度 檢查則需用lnm縫寬或更窄，否則其264nm的吸收度會偏低。 8.測定時除另有規(guī)定者外，應(yīng)在規(guī)定的吸收峰±2nm處，再測幾點的吸收度，以核 對供試品的吸收峰位置是否正確，并以吸收度**的波長作為測定波長，除另有規(guī) 定外吸收度**波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±lnm以內(nèi)，否則應(yīng)考慮試樣的同一 性、純度以及儀器波長的準確度 9.除另有規(guī)定外，比色法所用的空內(nèi)系指用同休積的溶劑代替對照品或供試品溶 液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。 10.當(dāng)吸收度和濃度關(guān)系不呈線性關(guān)系時，應(yīng)取數(shù)份梯度量的對照濃度，用溶劑補 充至同一休積，顯色后測定各份溶液的吸收度，然后以吸收度與相應(yīng)的濃度繪制標 準曲線，再根據(jù)供試品的吸收度在標準曲線上求出其含量。