原子吸收分光光度計的主要分析方法有三種

一，原子吸收火焰法

原子吸收的火焰法作為一種***常用的分析方法被廣泛的使用，對于一些常見的，含量在**可測范圍內(nèi)金屬元素而言，火焰原子吸收法簡單而快捷，結(jié)果的準(zhǔn)確度非常高。

二，原子吸收石墨爐法

原子吸收石墨爐法是原子吸收應(yīng)用中***經(jīng)典的方法，一般的石墨爐可以瞬時升溫至3000℃，對于一些含量**的或者一些高溫元素的定量檢測**有效，甚至很多儀器和分析專家認(rèn)為，之所以原子吸收分光光度計沒有被淘汰至今還在廣泛的適用正是因為原子吸收的石墨爐法的精度及***小檢測極限是目前所有測試方法中幾乎無可替代的。

三，原子吸收氫化物法

也稱冷原子法，一般用于測定汞、砷之類的元素。

所以在原子吸收分光光度計的選擇上，我們首先要選定主要是用哪一種方法去做金屬元素的含量測定，然后根據(jù)測定方法去確定原子吸收分光光度計的配置。

如何了解我們需要使用的方法是什么呢？有以下三點必須注意

一，測定的金屬元素種類

二，測定的金屬元素的大致含量范圍

三，測定的金屬元素的基體

了解了以上三點以后，我們就可以根據(jù)不同的元素，不同的含量，不同的基體去選擇不同的配置方案。

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事實上，分光光度計的設(shè)計試驗方法和工作試驗方法，允許吸光值在**范圍內(nèi)變化，即儀器有**的準(zhǔn)確度和**度。如EppendorfBiophotometer的準(zhǔn)確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測試時，離子濃度太高，也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值**、離子濃度較低的緩沖液，如TE，可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了**程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值***好在0.1-1.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計的測試范圍)。***后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值;混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大;換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的***小體積等多個操作事項。

除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。

蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)

這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要**320nm的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，***佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實驗中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個正常的現(xiàn)象。事實上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因為Warburg公式吸光值換算成濃度，乘以**的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾;另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。

比色法蛋白質(zhì)定量

蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的混合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。

帶您真正認(rèn)識原子吸收分光光度計

　　一、原子吸收分光光度計的工作試驗方法：　　元素在熱解石墨爐中被加熱原子化，成為基態(tài)原子蒸汽，對空心陰極燈發(fā)射的特征輻射進(jìn)行選擇性吸收。在**濃度范圍內(nèi)，其吸收強度與試液中被的含量成正比。其定量關(guān)系可用郎伯-比耳定律，A=-lgI/Io=-lgT=KCL，式中I為透射光強度；I0為發(fā)射光強度；T為透射比；L為光通過原子化器光程(長度)，每臺儀器的L值是固定的；C是被測樣品濃度；所以A=KC?！　±么郎y元素的共振輻射，通過其原子蒸汽，測定其吸光度的裝置稱為原子吸收分光光光源，原子化器，光學(xué)系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)。它主要用于痕量元素雜質(zhì)的分析，具有靈敏度高、**度好和選擇性好三大主要優(yōu)點。廣泛應(yīng)用于特種氣體，金屬有機化合物，金屬醇鹽中微量元素的分析。但是測定每種元素均需要相應(yīng)的空心陰極燈，這對檢測工作帶來不便。

　　二、原子吸收分光光度計的特點：　　1、靈敏度高：原子吸收分光光度法測定大多數(shù)金屬元素的相對靈敏度為1.0×10-8～1.0×10-10g?mL-1,非火焰原子吸收分光光度法的**靈敏度為1.0×10-12～1.0×10-14g。這是由于原子吸收分光光度法測定的是占原子總數(shù)99％以上的基態(tài)原子，而原子發(fā)射光譜測定的是占原子總數(shù)不到1％的激發(fā)態(tài)原子，所以前者的靈敏度和準(zhǔn)確度比后者高的多。　　2、精密度好：由于溫度的變化對測定影響較小，該法具有良好的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，精密度好。一般儀器的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1％～3％，性能好的儀器可達(dá)0.1％～0.5%?！　?、選擇性強：由于原子吸收譜線僅發(fā)生在主線系，而且譜線很窄，線重疊幾率較發(fā)射光譜要小很多，多以光譜干擾較小選擇性強，而且光譜干擾容易克服。大多數(shù)情況下，共存元素不對原子吸收光譜產(chǎn)生干擾。由于選擇性強，使得分析準(zhǔn)確快速。，分析一個元素只需數(shù)十秒至數(shù)分鐘。　　缺點：每測驗一種元素就要使用一種元素?zé)舳沟貌僮髀闊?。對于某些?fù)雜的樣品分析，尚存某些干擾問題需要解決。如何進(jìn)一步提高靈敏度和降低干擾是當(dāng)前和今后原子吸收分析工作者研究的重要課題。　　三、原子吸收分光光度計的應(yīng)用：　　原子吸收分光光度計現(xiàn)巳廣泛用于各個分析領(lǐng)域，主要有四個方面：理論研究；元素分析；有機物分析；金屬化學(xué)形態(tài)分析　　1、在理論研究中的應(yīng)用　　原子吸收可作為物理和物理化學(xué)的一種實驗手段，對物質(zhì)的一些基本性能進(jìn)行測定和研究。電熱原子化器容易做到控制蒸發(fā)過程和原子化過程，所以用它測定一些基本參數(shù)有很多優(yōu)點。用電熱原子化器所測定的一些有元素離開機體的活化能、氣態(tài)原子擴散系數(shù)、解離能、振子強度、光譜線輪廓的變寬、溶解度、蒸氣壓等?！　?、在元素分析中應(yīng)用　　原子吸收光譜分析，由于其靈敏度高、干擾少、分析復(fù)合快速，現(xiàn)巳廣泛地應(yīng)用于工業(yè)、農(nóng)業(yè)、生化、地質(zhì)、冶金、食品、環(huán)保等各個領(lǐng)域，目前原子吸收巳成為金屬元素分析的***有力工具之一，而且在許多領(lǐng)域巳作為標(biāo)準(zhǔn)分析方法。原子吸收光譜分析的特點決定了它在地質(zhì)和冶金分析中的重要地位，它不僅取代了許多一般的濕法化學(xué)分析，而且還與X-射線熒光分析，甚至與中子活化分析有著同等的地位。目前原子吸收法巳用來測定地質(zhì)樣品中40多種元素，并且大部分能夠達(dá)到足夠的靈敏度和很好的精密度。鋼鐵、合金和高純金屬中多種痕量元素的分析現(xiàn)在也多用原子吸收法。原子吸收在食品分析中越來越廣泛。食品和飲料中的20多種元素巳有滿意的原子吸收分析方法。生化和臨床樣品中必需元素和有害元素的分析現(xiàn)巳采用原子吸收法。有關(guān)石油產(chǎn)品、陶瓷、農(nóng)業(yè)樣品、**和涂料中金屬元素的原子吸收分析的文獻(xiàn)報道近些年來越來越多。水體和大氣等環(huán)境樣品的微量金屬元素分析巳成為原子吸收分析的重要領(lǐng)域之一。利用間接原子吸收法尚可測定某些非金屬元素。　　3、在有機物分析中的應(yīng)用　　利用間接法可以測定多種有機物。8-羥基喹啉(Cu)、醇類(Cr)、醛類(Ag)、酯類(Fe)、酚類(Fe)、聯(lián)乙酰(Ni)、酞酸(Cu)、脂肪胺(co)、氨基酸(Cu)、維生素C(Ni)、氨茴酸(Co)、雷米封(Cu)、甲酸奎寧(Zn)、有機酸酐(Fe)、苯甲基青霉素(Cu)、葡萄糖(Ca)、環(huán)氧化物水解酶(PbO、含鹵素的有機化合物(Ag)等多種有機物，均通過與相應(yīng)的金屬元素之間的化學(xué)計量反應(yīng)而間接測定?！　?、在金屬化學(xué)形態(tài)分析中的應(yīng)用　　通過氣相色譜和液體色譜分離然后以原子吸收光譜加以測定，可以分析同種金屬元素的不同有機化合物。例如汽油中5種烷基鉛，大氣中的5種烷基鉛、烷基硒、烷基胂、烷基錫，水體中的烷基胂、烷基鉛、烷基揭、烷基汞、有機鉻，生物中的烷基鉛、烷基汞、有機鋅、有機銅等多種金屬有機化合物，均可通過不同類型的光譜原子吸收聯(lián)用方式加以鑒別和測定。